Bdellastasin, ein Serinprotease-Inhibitor der Antistasin-Familie aus dem medizinischen Blutegel (Hirudo medicinalis) – Primärstruktur, Expression in Hefe und Charakterisierung des nativen und rekombinanten Inhibitors

We have reported earlier the isolation and amino acid composition of bdellin A from medical leech, and characterised it as an inhibitor of trypsin, plasmin and acrosin [Fritz, H., Gebhardt, M., Meister, R. & Fink, E. (1971) in Proceedings of the international research conference on proteinase inhibitors (Fritz, H. & Tschesche, H., eds) pp. 271-280, Walter de Gruyter, Berlin]. In the present study, one of several chromatographic forms of this inhibitor was isolated from a semi-pure preparation. Elucidation of its amino acid sequence revealed that bdellin A is a member of the antistasin family. Therefore, it was renamed bdellastasin to avoid confusion with bdellin B, which is another trypsin-plasmin inhibitor from the medical leech, but of the Kazal type. Furthermore, a synthetic gene of bdellastasin was constructed, and the protein expressed in Saccharomyces cerevisiae with yields of 29 mg/l. The recombinant bdellastasin was purified by hydrophobic interaction and anion-exchange chromatography. Comparison by mass spectroscopy, far-ultraviolet circular dichroism studies, sequence determination, and inhibition characteristics demonstrated the identity of recombinant and native bdellastasin. The Ki values of bdellastasin for inhibition of bovine trypsin and human plasmin are in the nanomolar range; no inhibition was detected for factor Xa, thrombin, tissue kallikrein, plasma kallikrein and chymotrypsin. Circular dichroism analyses indicated that bdellastasin is devoid of secondary-structural elements.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Eine chromatographische Form des früher beschriebenen Bdellin A aus dem medizinischen Blutegel wurde isoliert und als Mitglied der Antistasin-Familie identifiziert; der Inhibitor wurde in Bdellastasin umbenannt. Ein synthetisches Gen wurde in Saccharomyces cerevisiae exprimiert (29 mg/l); das rekombinante Protein war mit dem nativen identisch. Die Ki-Werte für bovines Trypsin und humanes Plasmin lagen im nanomolaren Bereich; für Faktor Xa, Thrombin, Gewebe- und Plasmakallikrein sowie Chymotrypsin wurde keine Hemmung nachgewiesen. Zirkulardichroismus-Analysen zufolge besitzt Bdellastasin keine Sekundärstrukturelemente.

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