Биотехнологическое получение рекомбинантных аналогов гирудина-1 из Hirudo medicinalis

Hirudin-1 is a highly selective inhibitor of thrombin secreted by salivary glands of the medicinal leech Hirudo medicinalis. This direct anticoagulant is used for the treatment and prevention of disorders in blood coagulation system. Apart from the existing recombinant analog of hirudin-1 (63-desulfatohirudin-1, desirudin) its modified analogs possessing higher activity and stability are of medical value. In this study artificial genes of hirudin and two its analogs (hirudin-1, [Leu1, Thr2]-hirudin-1 and [Leu1, Thr2]-hirudin-1/3) were synthesized and cloned in an expression vector pTWIN1 in frame with the gene of mini-intein SspDnaB from Synechocystis sp. Producing strains of the corresponding fusion proteins were constructed using E. coli strain ER2566. Biotechnological schemes for the production of 63-desulfatohirudin-1 and its analogs were developed. The scheme includes the following stages: isolation of the fusion protein after the desintegration of the cell biomass, refolding of the target peptide within the fusion protein, pH-inducible cleavage of the fusion protein, and chromatographic purification of the target product. Antithrombotic activity of the obtained peptides was determined by a standard amidolytic assay. The developed methods for the production of 63-desulfatohirudin-1, [Leu1, Thr2]-desulfatohirudin-1 [Leu1, Thr2]-desulfatohirudin-1/3 allowed to obtain these peptides with high yields (14, 25 and 24 mg per liter of cell culture respectively) and high activity (13423, 33333 and 19802 ATU/mg respectively).

Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.

Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.

Синтезированы искусственные гены гирудина-1 и двух его аналогов ([Leu1, Thr2]-гирудин-1 и [Leu1, Thr2]-гирудин-1/3), клонированные в вектор pTWIN1 в одной рамке с геном мини-интеина SspDnaB из Synechocystis sp.; продуценты созданы на штамме Escherichia coli ER2566. Разработана схема получения 63-десульфатогирудина-1 и аналогов: выделение слитого белка после дезинтеграции биомассы, рефолдинг, рН-индуцируемое расщепление и хроматографическая очистка; антитромботическую активность определяли амидолитическим методом. Выход пептидов составил 14, 25 и 24 мг на литр культуры при активности 13 423, 33 333 и 19 802 АТЕ/мг соответственно.

Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой

Другие рецензируемые исследования в разделе «Геномика и протеомика».

• Leech Salivary Proteome and Transcriptome: 434 Deduced Protein Sequences — Liu Z, Tong X, Su Y, et al. (2019)
• Medicinal Leech Draft Genome — Anticoagulant Gene Survey — Kvist S, Manzano-Marín A, de Carle D, Trontelj P, Siddall ME (2020)
• Влияние гирудотерапии на функции печени, липидный профиль и чувствительность к инсулину у крыс с метаболическим синдромом — Bilden A et al. (2026)
• Эффективность и безопасность гирудотерапии для улучшения показателей качества спермы при мужском бесплодии: рандомизированное контролируемое исследование — Abtahi-Forooshani M et al. (2026)
• Гирудотерапия при заживлении ран — Nair H et al. (2022)
• Медицинские пиявки и гирудотерапия — Gödekmerdan A et al. (2011)
• Кожная псевдолимфома после гирудотерапии: клинический случай и обзор — Hanner S et al. (2022)
• Гирудотерапия при ранней пресбиакузии у ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС в поставарийные годы — Zabolotnyi D, Mishchanchuk N (2019)
• Гирудотерапия (медицинские пиявки) в лечении обструкции верхних дыхательных путей у собаки — Trenholme H, Masseau I, Reinero C (2021)
• Лечение пиявками — Yantis M, O'Toole K, Ring P (2009)

Все исследования, проанализированные ASH →