Improving the bioactivity of rHirudin with boronophenylalanine site-specific modification
Research article published in Molecular medicine reports (2015)
Abstract
To improve the bioactivity of recombinant (r)Hirudin, the orthogonal pair MjBTyrRS/tRNATyr cua (made up of the boronophenylalanine, tRNA and tRNA synthetase), was selected to incorporate boronophenylalanine site‑specifically into rHirudin at the 63 sites in an Escherichia coli system in response to the TAG codon. Following fusion with the gIII signal peptide and a hexahistidine tag, the modified protein was secreted into Luria‑Bertani culture medium and purified by nickel-nitrilotriacetic acid affinity chromatography following a gel filtration column. In a 200 ml flask, the yield of boronophenylalanine‑modified hirudin was 10 mg l‑1 and that of rHirudin was 19 mg l‑1. The authenticity of the purified proteins was verified using matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectroscopy and antithrombin activity assays. The results revealed that the antithrombin activity of the boronophenylalanine‑modified hirudin to human thrombin was more enhanced than that of rHirudin. The modified hirudin demonstrated stronger proliferation inhibiting ability on fibroblast L929 cells compared with that of rHirudin.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Zusammenfassung
To improve the bioactivity of recombinant (r)Hirudin, the orthogonal pair MjBTyrRS/tRNATyr cua (made up of the boronophenylalanine, tRNA and tRNA synthetase), was selected to incorporate boronophenylalanine sitespecifically into rHirudin at the 63 sites in an Escherichia coli system in response to the TAG codon.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie berichtet über den ortsspezifischen Einbau von Borphenylalanin in rekombinantes Hirudin an Position 63 mithilfe eines gentechnisch veränderten Escherichia coli-Expressionssystems, mit dem Ziel, die Bioaktivität zu steigern. Das modifizierte Hirudin zeigte eine stärkere Antithrombin-Aktivität gegen menschliches Thrombin und eine stärkere Hemmung der Proliferation von Fibroblasten L929 im Vergleich zu unmodifiziertem rekombinantem Hirudin. Für den Zuständigkeitsbereich der ASH ist diese Arbeit relevant als ein Protein-Engineering-Vorhaben zur Steigerung der Potenz von Hirudin, einer Substanz, die unter 'Hirudins' indexiert ist und im Zentrum des Interessensgebiets der ASH steht. Einschränkend ist festzuhalten, dass es sich ausschließlich um präklinische In-vitro-Befunde handelt; es werden keine In-vivo-, pharmakokinetischen, Sicherheits- oder klinischen Daten präsentiert, und die funktionelle Bedeutung des Effekts auf die Fibroblastenproliferation ist nicht belegt.
Zitation
Improving the bioactivity of rHirudin with boronophenylalanine site-specific modification
Xin X et al. · Molecular medicine reports, 2015
Verwandter klinischer Kontext
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026