Amerikanische Gesellschaft für Hirudotherapie

Functional phage display of leech-derived tryptase inhibitor (LDTI): construction of a library and selection of thrombin inhibitors

Research article published in FEBS letters (1999)

Zuletzt aktualisiert: 18. Juni 2026Geprüft von: ASH Editorial Board
Forschungsartikel – EvidenzreviewArtikelreferenz
Evidence: Research reportArzneimittelentwicklungSpeichel-PharmakologieTanaka AS et al. · FEBS letters, 1999

Abstract

The recombinant phage antibody system pCANTAB 5E has been used to display functionally active leech-derived tryptase inhibitor (LDTI) on the tip of the filamentous M13 phage. A limited combinatorial library of 5.2 x 10(4) mutants was created with a synthetic LDTI gene, using a degenerated oligonucleotide and the pCANTAB 5E phagemid. The mutations were restricted to the P1-P4' positions of the reactive site. Fusion phages and appropriate host strains containing the phagemids were selected after binding to thrombin and DNA sequencing. The variants LDTI-2T (K8R, I9V, S10, K11W, P12A), LDTI-5T (K8R, I9V, S10, K11S, P12L) and LDTI-10T (K8R, I9L, S10, K11D, P12I) were produced with a Saccharomyces cerevisiae expression system. The new inhibitors, LDTI-2T and -5T, prolong the blood clotting time, inhibit thrombin (Ki 302 nM and 28 nM) and trypsin (Ki 6.4 nM and 2.1 nM) but not factor Xa, plasma kallikrein or neutrophil elastase. The variant LDTI-10T binds to thrombin but does not inhibit it. The relevant reactive site sequences of the thrombin inhibiting variants showed a strong preference for arginine in position P1 (K8R) and for valine in P1' (I9V). The data indicate further that LDTI-5T might be a model candidate for generation of active-site directed thrombin inhibitors and that LDTI in general may be useful to generate specific inhibitors suitable for a better understanding of enzyme-inhibitor interactions.

Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.

Publication typeJournal ArticleResearch Support, Non-U.S. Gov't
Indexed MeSH termsAmino Acid SequenceBacteriophagesBase SequenceChymasesCloning, MolecularDose-Response Relationship, DrugHumansKineticsModels, GeneticMolecular Sequence DataMutagenesis, InsertionalPeptide Library

Zusammenfassung

The recombinant phage antibody system pCANTAB 5E has been used to display functionally active leech-derived tryptase inhibitor (LDTI) on the tip of the filamentous M13 phage.

Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist

Diese Studie verwendete funktionelles Phagen-Display, um den aus dem Blutegel stammenden Tryptase-Inhibitor (LDTI) auf M13-Phagenoberflächen zu präsentieren, und erstellte eine kombinatorische Bibliothek von etwa 52.000 Mutanten, die an den P1–P4'-Positionen des reaktiven Zentrums variierten. Nach Selektion gegen Thrombin wurden drei Varianten in Hefe hergestellt: LDTI-2T und LDTI-5T hemmten Thrombin (Ki 302 nM bzw. 28 nM) und verlängerten die Blutgerinnungszeit, während LDTI-10T Thrombin band, aber nicht hemmte. Die Ergebnisse zeigten eine starke Präferenz für Arginin an P1 und Valin an P1' für die Thrombinhemmung, wobei LDTI-5T als Modellkandidat für die Erzeugung aufs aktive Zentrum gerichteter Thrombininhibitoren identifiziert wurde. Dies ist für das ASH-Gebiet relevant, da es direkt ein aus dem Blutegel stammendes Inhibitorgerüst für eine neue thrombinhemmende Aktivität entwickelt. Die Einschränkung besteht darin, dass es sich um eine In-vitro-Moleküldesign-Studie handelt, für die im Abstract keine Tier- oder klinischen Daten berichtet werden.

Zitation

Functional phage display of leech-derived tryptase inhibitor (LDTI): construction of a library and selection of thrombin inhibitors

Tanaka AS et al. · FEBS letters, 1999

DOI

Verwandter klinischer Kontext

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Drug PipelineDrug DevelopmentDirect Thrombin InhibitorsSalivary Gland SecretionAnti-Inflammatory MechanismsSalivary ComplexHirudinAnticoagulation CompoundsHemostasisOtolaryngologyLDTIProteinase Inhibitors

Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026

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