Neues antikoagulatorisches Protein aus dem medizinischen Blutegel

The saliva of the medicinal leech contains various anticoagulants. Some of them, such as hirudin, are well known. However, it is reasonable to believe that not all anticoagulant proteins from medicinal leech saliva have been identified. We previously performed a comprehensive study of the transcriptome, genome, and proteome of leech salivary gland cells, which led to the discovery of several previously unknown hypothetical proteins that may have anticoagulant properties. Subsequently, we obtained a series of recombinant proteins and investigated their impact on coagulation in in vitro assays. We identified a previously undescribed protein that exhibited a high ability to suppress coagulation. The His-tagged recombinant protein was expressed in Escherichia coli and purified using metal chelate chromatography. To determine its activity, commonly used coagulation methods were used: activated partial thromboplastin time, prothrombin time, and thrombin inhibition clotting assay. Clotting and chromogenic assays for factor Xa inhibition were performed to evaluate anti-Xa activity. We used recombinant hirudin as a control anticoagulant protein in all experiments. The new protein showed significantly greater inhibition of coagulation than hirudin at the same molar concentrations in the activated partial thrombin time assay. However, hirudin demonstrated better results in the direct thrombin inhibition test, although the tested protein also exhibited the ability to inhibit thrombin. The chromogenic analysis of factor Xa inhibition revealed no activity, whereas the clotting test for factor Xa showed the opposite result. Thus, a new powerful anticoagulant protein has been discovered in the medicinal leech. This protein is homologous to antistatin, with 28 % identical amino acid residues. The recombinant protein was expressed in E. coli. This protein is capable of directly inhibiting thrombin, and based on indirect evidence, other proteases of the blood coagulation cascade have been identified.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Aus einer vorherigen Transkriptom-, Genom- und Proteomstudie der Speicheldrüsenzellen medizinischer Blutegel wurden rekombinante Proteine in Gerinnungstests geprüft. Ein bislang unbeschriebenes, in Escherichia coli exprimiertes Protein unterdrückte die Gerinnung stark: In der aPTT hemmte es bei gleicher molarer Konzentration signifikant stärker als Hirudin, im direkten Thrombininhibitionstest war Hirudin besser. Der chromogene Faktor-Xa-Test zeigte keine Aktivität, der Xa-Gerinnungstest das Gegenteil. Das Protein ist zu Antistatin homolog (28 % identische Aminosäurereste), hemmt Thrombin direkt und nach indirekten Hinweisen weitere Proteasen der Gerinnungskaskade.

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