Improving the bioactivity of rHirudin with boronophenylalanine site-specific modification
Research article published in Molecular medicine reports (2015)
Abstract
To improve the bioactivity of recombinant (r)Hirudin, the orthogonal pair MjBTyrRS/tRNATyr cua (made up of the boronophenylalanine, tRNA and tRNA synthetase), was selected to incorporate boronophenylalanine site‑specifically into rHirudin at the 63 sites in an Escherichia coli system in response to the TAG codon. Following fusion with the gIII signal peptide and a hexahistidine tag, the modified protein was secreted into Luria‑Bertani culture medium and purified by nickel-nitrilotriacetic acid affinity chromatography following a gel filtration column. In a 200 ml flask, the yield of boronophenylalanine‑modified hirudin was 10 mg l‑1 and that of rHirudin was 19 mg l‑1. The authenticity of the purified proteins was verified using matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectroscopy and antithrombin activity assays. The results revealed that the antithrombin activity of the boronophenylalanine‑modified hirudin to human thrombin was more enhanced than that of rHirudin. The modified hirudin demonstrated stronger proliferation inhibiting ability on fibroblast L929 cells compared with that of rHirudin.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
To improve the bioactivity of recombinant (r)Hirudin, the orthogonal pair MjBTyrRS/tRNATyr cua (made up of the boronophenylalanine, tRNA and tRNA synthetase), was selected to incorporate boronophenylalanine sitespecifically into rHirudin at the 63 sites in an Escherichia coli system in response to the TAG codon.
Почему это важно для гирудотерапии
В данном исследовании сообщается о сайт-специфичном включении боронофенилаланина в рекомбинантный гирудин в положении 63 с использованием сконструированной системы экспрессии Escherichia coli в целях повышения биологической активности. Модифицированный гирудин продемонстрировал более высокую антитромбиновую активность в отношении человеческого тромбина и более выраженное подавление пролиферации фибробластов L929 по сравнению с немодифицированным рекомбинантным гирудином. Для профильной области ASH данная работа релевантна как исследование в области белковой инженерии, направленное на повышение активности гирудина — вещества, индексируемого под рубрикой «Hirudins» и занимающего центральное место в сфере интересов ASH. Оговорка заключается в том, что это лишь доклинические данные in vitro; данные in vivo, фармакокинетические исследования, данные по безопасности или клинические данные не представлены, а функциональная значимость эффекта подавления пролиферации фибробластов не установлена.
Цитирование
Improving the bioactivity of rHirudin with boronophenylalanine site-specific modification
Xin X et al. · Molecular medicine reports, 2015
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.