Avoiding ambient air in test tubes during incubations of human whole-blood minimizes complement background activation
Methodology published in J Immunol Methods (2020)
Abstract
BACKGROUND: In vitro, the complement system can be studied in test tubes incubated with anticoagulated human whole-blood. Background activation of complement may mask inflammatory signals. Air bubbles are known to activate complement. We examined if removing ambient air from test tubes before incubation reduced background complement activation. METHODS: Blood from twelve donors was anticoagulated with the thrombin inhibitor lepirudin and incubated with either no air, ambient air or air bubbles in polypropylene tubes at 37 °C for 180 min on a roller mixer. After incubation, EDTA was added, plasma isolated and analyzed for seven complement activation products using ELISA. Results are presented as means with 95% confidence intervals. RESULTS: Blood incubated without air had significantly lower complement activation compared to blood incubated with ambient air; C4d 273 (192-364) vs. 379 (263-494) ng/mL (p = 0.002), C4bc 8.2 (4.1-13) vs. 12 (3.2-21) CAU/mL (p = 0.01), C3a 1351 (873-1838) vs. 2944 (2315-3572) ng/mL (p = 0.0005), C3bc 31 (17-46) vs. 68 (52-84) CAU/mL (p = 0.002), C3bBbP 134 (97-171) vs. 427 (358-506) CAU/mL (p < 0.0001), C5a 3.5 (1.9-5 0.2) vs. 15 (1.8-27)) ng/mL (p = 0.003), TCC 4.6 (2.8-6.3) vs. 9.9 (7.3-12) CAU/mL (p = 0.006). At the end of the experiment blood incubated with air bubbles had a higher complement activation than blood incubated with ambient air with an average 26 fold increase (range 1.6-59) from baseline of all activation products; C4d 551 (337-766) ng/mL, C4bc 21 (5.0-36) CAU/mL, C3a 3983 (3518-4448) ng/mL, C4bc 103 (86-121) CAU/mL, C3bBbP 626 (543-708) CAU/mL, C5a 10 (2.8-18) ng/mL and TCC 10 (6.0-14) CAU/mL. CONCLUSION: Avoiding air in test tubes during whole-blood experiments reduced background complement activation substantially and represents an important improvement to the lepirudin whole-blood model. This could also apply to other in vitro models.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
Lepirudin whole-blood model improved by removing ambient air reduces background complement activation substantially (~26x), critical methodological advance for in vitro inflammation studies.
Почему это важно для гирудотерапии
Данное исследование было направлено на выяснение того, снижает ли удаление окружающего воздуха из пробирок во время инкубации цельной человеческой крови, антикоагулированной лепирудином, фоновую активацию системы комплемента. Используя кровь двенадцати доноров, авторы показали достоверно более низкую активацию семи продуктов комплемента (C4d, C4bc, C3a, C3bc, C3bBbP, C5a, TCC) при исключении воздуха и описали это как усовершенствование модели цельной крови с лепирудином. В аннотации лепирудин упоминается исключительно как ингибитор тромбина, применяемый для антикоагуляции, и не содержит сведений о биологии пиявок, веществах пиявочного происхождения или гирудотерапии. Никаких пиявок, компонентов секрета пиявок или вмешательств в рамках гирудотерапии не изучалось; данная работа оптимизирует методику in vitro анализа активации комплемента.
Цитирование
Avoiding ambient air in test tubes during incubations of human whole-blood minimizes complement background activation.
Storm BS et al. · Journal of immunological methods, 2020
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.