Technical improvements in genetic manipulation of Pichia pastoris and their application in hirudin expression
Research article published in Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao (2001)
Abstract
Pichia pastoris has become an increasingly popular host for heterologous protein production. However, there is neither a high-efficient transformation method nor a fast colony-PCR assay for the yeast yet. In this paper, we report a transformation procedure by electroporation, which reaches the value of up to 2800 transformants/microgram DNA. By using a cold and heat treatment and a modified PCR buffer, we established a simple and reliable colony-PCR protocol to detect recombinant P. pastoris clones, which is comparable to the conventional assay for E. coli colonies. With these two novel techniques, we have successfully achieved the expression of hirudin, an antithrombin agent, in Pichia pastoris. The secreted hirudin maintains a biological activity of 82 antithrombian units per milliliter supernatant from the media.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
Transformation procedure by electroporation reaching 2800 transformants/microgram DNA for Pichia pastoris; expression of hirudin in P.
Почему это важно для гирудотерапии
В данном исследовании представлены усовершенствованные методы генетической манипуляции Pichia pastoris — протокол трансформации методом электропорации (до 2800 трансформантов на микрограмм ДНК) и метод colony-ПЦР — а также их применение для экспрессии гирудина, антитромбинового средства, с секрецией на уровне 82 антитромбиновых единиц на миллилитр культуральной жидкости. Это имеет прямое отношение к ASH, поскольку гирудин является классическим антикоагулянтом слюны медицинской пиявки и определяющей молекулой секретома пиявок, лежащей в основе антикоагулянтных эффектов гирудотерапии; рекомбинантные платформы производства важны для обеспечения надёжных поставок гирудина и терапевтических средств на его основе для исследовательского и клинического применения. Оговорка: данное исследование относится к области биотехнологии продукции/экспрессии, а не к клиническим или ин-виво исследованиям эффективности, а сообщаемая активность отражает выход экспрессии в культуральной жидкости, а не эффективность очищенного препарата или сравнение с нативным гирудином пиявочного происхождения.
Цитирование
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.