Analysis of recombinant proteins by isoelectric focusing in immobilized pH gradients
Research article published in Electrophoresis (1992)
Abstract
Isoelectric focusing in immobilized pH gradients (IEF-IPG) was used to analyze three different recombinant proteins. Recombinant leech hirudin (65 amino acids, three disulfide bonds) expressed in Saccharomyces cerevisiae as a secreted protein and purified by anion-exchange and reversed-phase chromatography proved to be homogeneous with regard to its isoelectric point (pI). In addition, the theoretical pI, calculated on the basis of the primary structure, corresponded precisely to the measured pI of 4.30. IEF-IPG was further employed to follow the stability of recombinant hirudin at pH 9, indicating that deamidation occurred under these conditions. A variant of recombinant human alpha 1-antitrypsin (AAT) (389 amino acids, one cysteine residue) expressed in Escherichia coli and purified by anion-exchange, metal chelate and hydrophobic-interaction chromatography appeared to be homogeneous by polyacrylamide gel electrophoresis under reducing and denaturing conditions as well as by various high performance liquid chromatography methods. However, some heterogeneity was detected by IEF-IPG between pH 5-6. The measured pI values of 5.43-5.58 were slightly lower than the calculated pI based on the primary structure (5.72). This indicated deamidations of Asn or Gln residues. A recombinant Schistosoma mansoni parasite antigen, p28 (210 amino acids, one cysteine residue) obtained after intracellular expression in Saccharomyces cerevisiae and affinity purification on glutathione agarose was analyzed by IEF-IPG in a pH 7.3-8.3 gradient. It appeared to be heterogeneous with regard to its pI, with the major component having a pI of 7.81 compared to the calculated value of 7.17.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
IEF-IPG analysis of recombinant leech hirudin expressed in S. cerevisiae; homogeneous pI of 4.30 matching primary structure; deamidation detected under alkaline conditions.
Почему это важно для гирудотерапии
В данном исследовании метод изоэлектрического фокусирования в иммобилизованных градиентах pH (ИЭФ-ИГР) был применен для анализа трех рекомбинантных белков, включая рекомбинантный пиявочный гирудин, экспрессируемый в Saccharomyces cerevisiae, для оценки зарядовой гомогенности и стабильности. Рекомбинантный пиявочный гирудин (65 аминокислот, три дисульфидные связи) оказался гомогенным с измеренным pI 4,30, совпадающим с теоретическим значением, а ИЭФ-ИГР также отслеживал деамидирование при pH 9. Для ASH эта работа предоставляет аналитическую характеристику белка пиявочного происхождения, хотя в автореферате не описаны ни его биологическая функция, ни какой-либо фармацевтический контекст. Оговорка: это статья по аналитическим методам, посвященная характеристике заряда белка; она не содержит терапевтических, фармакологических, данных in vivo или клинических данных об активности гирудина.
Цитирование
Analysis of recombinant proteins by isoelectric focusing in immobilized pH gradients.
Bischoff R et al. · Electrophoresis, 1992
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.