Анализ рекомбинантных белков методом изоэлектрического фокусирования в иммобилизованных градиентах pH

Isoelectric focusing in immobilized pH gradients (IEF-IPG) was used to analyze three different recombinant proteins. Recombinant leech hirudin (65 amino acids, three disulfide bonds) expressed in Saccharomyces cerevisiae as a secreted protein and purified by anion-exchange and reversed-phase chromatography proved to be homogeneous with regard to its isoelectric point (pI). In addition, the theoretical pI, calculated on the basis of the primary structure, corresponded precisely to the measured pI of 4.30. IEF-IPG was further employed to follow the stability of recombinant hirudin at pH 9, indicating that deamidation occurred under these conditions. A variant of recombinant human alpha 1-antitrypsin (AAT) (389 amino acids, one cysteine residue) expressed in Escherichia coli and purified by anion-exchange, metal chelate and hydrophobic-interaction chromatography appeared to be homogeneous by polyacrylamide gel electrophoresis under reducing and denaturing conditions as well as by various high performance liquid chromatography methods. However, some heterogeneity was detected by IEF-IPG between pH 5-6. The measured pI values of 5.43-5.58 were slightly lower than the calculated pI based on the primary structure (5.72). This indicated deamidations of Asn or Gln residues. A recombinant Schistosoma mansoni parasite antigen, p28 (210 amino acids, one cysteine residue) obtained after intracellular expression in Saccharomyces cerevisiae and affinity purification on glutathione agarose was analyzed by IEF-IPG in a pH 7.3-8.3 gradient. It appeared to be heterogeneous with regard to its pI, with the major component having a pI of 7.81 compared to the calculated value of 7.17.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.

Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.

Метод изоэлектрического фокусирования в иммобилизованных градиентах pH (IEF-IPG) применён к трём рекомбинантным белкам. Рекомбинантный гирудин пиявки (65 аминокислот, три дисульфидные связи), секретируемый Saccharomyces cerevisiae, оказался гомогенным по изоэлектрической точке: измеренный pI 4,30 точно совпал с расчётным; при pH 9 метод выявил деамидирование. Вариант α1-антитрипсина человека (389 аминокислот) из Escherichia coli был гетерогенен (pI 5,43–5,58 против расчётных 5,72), а антиген p28 Schistosoma mansoni — также гетерогенен: pI основной фракции 7,81 при расчётных 7,17.

Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой

Другие рецензируемые исследования в разделе «Фармакология секрета слюнных желёз».

• Медицинские пиявки и гирудотерапия — Gödekmerdan A et al. (2011)
• Перекисное окисление липидов слюны у пациентов с постковидным синдромом на фоне гирудотерапии — Serikbayeva S et al. (2024)
• Лечение медицинскими пиявками при болевых синдромах: нарративный обзор — Koeppen D, Aurich M, Rampp T (2014)
• Иммуномодулирующие эффекты экстракта слюны медицинской пиявки на активированные макрофаги in vitro — Ayhan H et al. (2024)
• Ингибиторы протеиназ медицинской пиявки Hirudo medicinalis — Baskova I, Zavalova L (2001)
• Полифункциональность дестабилазы — лизоцима медицинской пиявки — Baskova I, Zavalova L (2008)
• «Удвоение»: идентификация и характеристика тандем-гирудина из азиатской медицинской пиявки Hirudinaria manillensis — Lukas P et al. (2022)
• Применение медицинской пиявки в лечении заболеваний уха — Seleznev K et al. (1992)
• Рекомбинантная дестабилаза из Hirudo medicinalis способна растворять тромбы человека in vitro — Bobrovsky P et al. (2021)
• Влияние рассеяния углеродных нанотрубок в окружающей среде на водного беспозвоночного Hirudo medicinalis — Girardello R et al. (2015)

Все исследования, проанализированные ASH →