Isolation of recombinant hirudin by preparative high-performance liquid chromatography
Research article published in J Chromatogr (1989)
Abstract
The purification of recombinant hirudin variant 2-Lys47 (rHV2-Lys47), produced by a genetically engineered yeast strain, is described. rHV2-Lys47 expressed and secreted into the culture medium was the starting material for the purification process of hirudin from the culture broth after cell harvesting by centrifugation. Initial purification of the product by preparative reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) using step-gradient elution, followed by precipitation of rHV2-Lys47 in the presence of acetone, removed most of the contaminants from the culture medium. The pure product was obtained by successive preparative anion-exchange and reversed-phase HPLC on silica based stationary phases. Characterization of the final product by analytical HPLC, isoelectric focusing gel electrophoresis, quantitative amino acid composition and sequence analysis did not reveal any contaminants. Liquid secondary ion mass spectrometry was used to confirm its primary structure. The isolated product was tested in an inhibition assay of human alpha-thrombin and proved to be fully active.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
Three-step HPLC purification of recombinant hirudin variant 2-Lys47 from yeast culture broth; pure product fully active in human alpha-thrombin inhibition assay.
Почему это важно для гирудотерапии
В данной статье описывается очистка рекомбинантного варианта гирудина 2-Lys47 (rHV2-Lys47), продуцируемого генетически модифицированным штаммом дрожжей, с использованием последовательных препаративных стадий обращенно-фазовой и анионообменной ВЭЖХ. Чистота конечного продукта подтверждена с помощью аналитической ВЭЖХ, изоэлектрического фокусирования, анализа аминокислотного состава, секвенирования и масс-спектрометрии; в тесте на ингибирование альфа-тромбина человека продемонстрирована полная активность. В автореферате гирудин упоминается непосредственно как целевой белок, что делает эту работу актуальной для производства и контроля качества этого антикоагулянтного белка. ОГОВОРКА: это исследование в области биопроцессной инженерии и химии белков с участием рекомбинантного белка, продуцируемого дрожжами, а не материала пиявочного происхождения; в нем нет пиявок, применения в гирудотерапии и данных in vivo.
Цитирование
Isolation of recombinant hirudin by preparative high-performance liquid chromatography.
Bischoff R et al. · J Chromatogr, 1989
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.