Base estructural de la unión de la RGD-hirudina a la trombina: Tyr3 y cinco residuos C-terminales son cruciales para inhibir la actividad de la trombina

BACKGROUND: Hirudin is an anti-coagulation protein produced by the salivary glands of the medicinal leech Hirudomedicinalis. It is a powerful and specific thrombin inhibitor. The novel recombinant hirudin, RGD-hirudin, which contains an RGD motif, competitively inhibits the binding of fibrinogen to GPIIb/IIIa on platelets, thus inhibiting platelet aggregation while maintaining its anticoagulant activity. RESULTS: Recombinant RGD-hirudin and six mutant variants (Y3A, S50A, Q53A, D55A, E57A and I59A), designed based on molecular simulations, were expressed in Pichia pastoris. The proteins were refolded and purified to homogeneity as monomers by gel filtration and anion exchange chromatography. The anti-thrombin activity of the six mutants and RGD-hirudin was tested. Further, we evaluated the binding of the mutant variants and RGD-hirudin to thrombin using BIAcore surface plasmon resonance analysis (SPR). Kinetics and affinity constants showed that the KD values of all six mutant proteins were higher than that of RGD-hirudin. CONCLUSIONS: These findings contribute to a novel understanding of the interaction between RGD-hirudin and thrombin.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

El resumen se deja sin traducir para conservar la redacción original de los autores.

La RGD-hirudina es una hirudina recombinante con motivo RGD que inhibe competitivamente la unión del fibrinógeno a GPIIb/IIIa y así la agregación plaquetaria. En Pichia pastoris se expresaron la RGD-hirudina y seis mutantes (Y3A, S50A, Q53A, D55A, E57A, I59A), replegados y purificados. En el análisis BIAcore-SPR todos los mutantes mostraron valores de KD superiores a los de la RGD-hirudina. Los autores señalan que los hallazgos aportan una nueva comprensión de la interacción entre la RGD-hirudina y la trombina.

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