Isolation of recombinant hirudin by preparative high-performance liquid chromatography
Research article published in J Chromatogr (1989)
Abstract
The purification of recombinant hirudin variant 2-Lys47 (rHV2-Lys47), produced by a genetically engineered yeast strain, is described. rHV2-Lys47 expressed and secreted into the culture medium was the starting material for the purification process of hirudin from the culture broth after cell harvesting by centrifugation. Initial purification of the product by preparative reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) using step-gradient elution, followed by precipitation of rHV2-Lys47 in the presence of acetone, removed most of the contaminants from the culture medium. The pure product was obtained by successive preparative anion-exchange and reversed-phase HPLC on silica based stationary phases. Characterization of the final product by analytical HPLC, isoelectric focusing gel electrophoresis, quantitative amino acid composition and sequence analysis did not reveal any contaminants. Liquid secondary ion mass spectrometry was used to confirm its primary structure. The isolated product was tested in an inhibition assay of human alpha-thrombin and proved to be fully active.
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Resumen
Three-step HPLC purification of recombinant hirudin variant 2-Lys47 from yeast culture broth; pure product fully active in human alpha-thrombin inhibition assay.
Por qué esto importa para la hirudoterapia
Este artículo describe la purificación de la variante 2-Lys47 de hirudina recombinante (rHV2-Lys47), producida por una cepa de levadura genéticamente modificada, mediante etapas secuenciales de HPLC preparativa en fase reversa y de intercambio aniónico. El producto final se confirmó puro por HPLC analítica, enfoque isoeléctrico, análisis de composición aminoacídica, análisis de secuencia y espectrometría de masas, y demostró actividad completa en un ensayo de inhibición de alfa-trombina humana. La hirudina se menciona directamente en el resumen como la proteína diana, lo que hace este trabajo relevante para la producción y el control de calidad de esta proteína anticoagulante. ADVERTENCIA: Se trata de un estudio de ingeniería de bioprocesos y química de proteínas que involucra una proteína recombinante producida en levadura en lugar de material derivado de sanguijuela; no incluye sanguijuelas, ni aplicación de hirudoterapia, ni datos in vivo.
Citación
Isolation of recombinant hirudin by preparative high-performance liquid chromatography.
Bischoff R et al. · J Chromatogr, 1989
Contexto clínico relacionado
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Añadido a la biblioteca ASH: May 27, 2026 · Última actualización del sitio: 18 de junio de 2026