Expression of recombinant Hirudin in transgenic mice milk driven by the goat beta-casein promoter
Research article published in Biotechnol J (2008)
Abstract
Hirudin, isolated from the leech Hirudo medicinalis, inhibits thrombin directly and several expression systems have been used to produce recombinant Hirudin (rHirudin) for pharmaceutical purposes. A DNA fragment containing the Hirudin coding sequence and goat beta-casein secretion signal was chemically synthesized in this study. The synthetic DNA then was further constructed into a goat beta-casein expression vector for mouse transgenesis. Four lines of transgenic mice were successfully developed and one line showed a meaningful anti-thrombin activity of 40,000 anti-thrombin units (ATU)/mL in their milk. In this animal line, Hirudin mRNA was found in samples of uterus and kidney with insignificant anti-thrombin activity (</= 280 ATU/g wet tissue); however, mammary glands showed a higher activity of 780 ATU/g wet tissue. Transgenic mice showed no evident physical abnormality. The purified rHirudin was further analyzed by amino acid analysis and was found to contain a tyrosine O-sulfate residue that is absent in rHirudin expression either through Escherichia coli or yeast host systems. Experimental results demonstrated that the beta-casein-promoted Hirudin transgene could be successfully expressed in a murine model and may be applicable to large mammals such as livestock for mass production of rHirudin for pharmaceuticals.
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Zusammenfassung
Transgenic mice secreted recombinant hirudin in milk at 40000 anti-thrombin units/mL; purified rHirudin contained tyrosine O-sulfate residue absent in E.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie erzeugte rekombinantes Hirudin in der Milch transgener Mäuse unter Verwendung einer chemisch synthetisierten Hirudin-kodierenden Sequenz mit einem Sekretionssignal von Ziegen-β-Casein und ergab eine Linie, die 40.000 Antithrombin-Einheiten (ATU)/mL in der Milch exprimiert. Mammagewebe zeigte 780 ATU/g Nassgewebe, während andere Organe eine unbedeutende Aktivität aufwiesen; gereinigtes rHirudin enthielt einen Tyrosin-O-Sulfat-Rest, der in E. coli- oder Hefe-exprimiertem Produkt fehlt, und transgene Mäuse zeigten keine erkennbare physische Anomalie. Für ASH ist dies relevant, da es die rekombinante Produktion von Hirudin, einem Schlüsselantikoagulans aus Blutegeln, behandelt, mit potenzieller Anwendbarkeit auf große Säugetiere für die pharmazeutische Massenproduktion. Caveat: Dies ist eine proof-of-concept biotechnologische Studie an transgenen Tieren; es werden keine pharmakologische Wirksamkeit, Sicherheit oder klinische Daten über das grobe äußere Erscheinungsbild hinaus präsentiert.
Zitation
Expression of recombinant Hirudin in transgenic mice milk driven by the goat beta-casein promoter.
Yen CH et al. · Biotechnol J, 2008
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026