Improvement of the specificity of dipetarudin by site directed mutagenesis
Research article published in Thrombosis and haemostasis (2005)
Abstract
Protease specificity is crucial to the design of thrombin inhibitors as inhibition of other physiologically relevant serine-proteases can compromise their clinical use. Dipetarudin, a potent thrombin inhibitor, also inhibits trypsin and plasmin. Due to the specificity of an inhibitor being influenced by the amino acid residue at the P1 position, we replaced the Arg10 at P1 position of dipetarudin by a histidine, which is the P1 residue of rhodniin, a very specific thrombin inhibitor. The amino acid replacement was carried out by site directed mutagenesis. The mutant, dipetarudinR10H, showed a loss of plasmin and trypsin inhibitory activities present in its wild-type counterpart and a 3-fold higher dissociation constant for thrombin than dipetarudin. However, compared to dipetarudin and r-hirudin, dipetarudinR10H showed similar activity in coagulation screening assays such as activated partial thromboplastin time (aPTT), prothrombin time (PT), ecarin clotting time (ECT) and ecarin chromogenic assay (ECA).
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Zusammenfassung
Protease specificity is crucial to the design of thrombin inhibitors as inhibition of other physiologically relevant serine-proteases can compromise their clinical use.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie verwendete ortsgerichtete Mutagenese, um das P1-Arginin an Position 10 von Dipetarudin durch Histidin zu ersetzen, wobei eine Mutante (DipetarudinR10H) erzeugt wurde, die ihre Plasmin- und Trypsininhibitoraktivität verlor. In Gerinnungs-Screening-Assays, einschließlich aktiviertem partiellen Thromboplastinzeit und Prothrombinzeit, zeigte DipetarudinR10H eine ähnliche Aktivität wie sowohl Dipetarudin als auch r-Hirudin. Die Arbeit ist relevant, da sie gentechnisch veränderte Thrombininhibitoren untersucht und deren funktionelle Gerinnungseffekte direkt mit r-Hirudin vergleicht. Der Abstract identifiziert jedoch weder die biologischen Ursprünge von r-Hirudin oder Dipetarudin noch bezieht er lebende Blutegel ein. Daher ist die Verbindung zum Blutegelsekretom ausschließlich indirekt und beruht allein auf dem In-vitro-Vergleich mit r-Hirudin.
Zitation
Improvement of the specificity of dipetarudin by site directed mutagenesis
Lpez M et al. · Thrombosis and haemostasis, 2005
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026