Verbesserung der Spezifität von Dipetarudin durch ortsgerichtete Mutagenese

Protease specificity is crucial to the design of thrombin inhibitors as inhibition of other physiologically relevant serine-proteases can compromise their clinical use. Dipetarudin, a potent thrombin inhibitor, also inhibits trypsin and plasmin. Due to the specificity of an inhibitor being influenced by the amino acid residue at the P1 position, we replaced the Arg10 at P1 position of dipetarudin by a histidine, which is the P1 residue of rhodniin, a very specific thrombin inhibitor. The amino acid replacement was carried out by site directed mutagenesis. The mutant, dipetarudinR10H, showed a loss of plasmin and trypsin inhibitory activities present in its wild-type counterpart and a 3-fold higher dissociation constant for thrombin than dipetarudin. However, compared to dipetarudin and r-hirudin, dipetarudinR10H showed similar activity in coagulation screening assays such as activated partial thromboplastin time (aPTT), prothrombin time (PT), ecarin clotting time (ECT) and ecarin chromogenic assay (ECA).

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Dipetarudin ist ein potenter Thrombininhibitor, hemmt aber auch Trypsin und Plasmin. Durch ortsgerichtete Mutagenese wurde Arg10 an der P1-Position durch Histidin ersetzt, den P1-Rest des sehr spezifischen Thrombininhibitors Rhodniin. Die Mutante DipetarudinR10H verlor die Plasmin- und Trypsin-Hemmung des Wildtyps, zeigte jedoch eine dreifach höhere Dissoziationskonstante für Thrombin als das Ausgangsmolekül. In Gerinnungstests (aPTT, PT, ECT, ECA) war ihre Aktivität mit der von Dipetarudin und r-Hirudin vergleichbar.

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