Trennung der monomerisierenden und der Lysozymaktivität der Destabilase aus dem Speicheldrüsensekret des medizinischen Blutegels

Destabilase, endo-epsilon-(gamma-Glu)-Lys-isopeptidase, was prepared from the salivary gland secretion of the medicinal leech (Hirudo medicinalis). The secretion prepared by the known method of Rigbi et al. (1987) (secretion-K) lacks the destabilase-characteristic highly specific isopeptidase activity (the D-dimer-monomerizing activity) because of its degradation by proteolytic activity (the substrate of Glp-Ala-Ala-Leu-pNA) due to contamination with leech intestinal channel contents. Therefore, we have elaborated a new technique for preparation of a true leech secretion (secretion-I). This secretion is characterized by the complete absence of the leech intestinal channel contents and has no proteolytic activity. For the first time the destabilase-specific D-dimer-monomerizing and lysozyme activities were separated by fractionation of secretion-I by HPLC gel filtration through Superose S-12. For the purified destabilase preparation, these activities were separated by reversed-phase chromatography in an acetonitrile gradient (0-60%) in the presence of 0.1% trifluoroacetic acid. The monomerizing activity of destabilase is responsible for the ability of secretion-I to dissolve stabilized fibrin via isopeptidolysis of alpha-alpha and gamma-gamma fibrin chains bound by epsilon-(gamma-Glu)-Lys-isopeptide bonds.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Aus dem Speicheldrüsensekret des medizinischen Blutegels (Hirudo medicinalis) wurde Destabilase (endo-ε-(γ-Glu)-Lys-Isopeptidase) gewonnen. Das herkömmliche Sekret-K nach Rigbi et al. (1987) verliert die Destabilase-typische Isopeptidaseaktivität durch Kontamination mit Darminhalt. Die Autoren entwickelten eine neue Methode zur Gewinnung eines reinen Sekrets (Sekret-I). Durch HPLC-Gelfiltration über Superose S-12 und Umkehrphasenchromatographie im Acetonitril-Gradienten (0–60 %) mit 0,1 % Trifluoressigsäure wurden die D-Dimer-monomerisierende und die Lysozymaktivität erstmals getrennt; die monomerisierende Aktivität löst stabilisiertes Fibrin durch Isopeptidolyse der α-α- und γ-γ-Fibrinketten.

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