Technical improvements in genetic manipulation of Pichia pastoris and their application in hirudin expression
Research article published in Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao (2001)
Abstract
Pichia pastoris has become an increasingly popular host for heterologous protein production. However, there is neither a high-efficient transformation method nor a fast colony-PCR assay for the yeast yet. In this paper, we report a transformation procedure by electroporation, which reaches the value of up to 2800 transformants/microgram DNA. By using a cold and heat treatment and a modified PCR buffer, we established a simple and reliable colony-PCR protocol to detect recombinant P. pastoris clones, which is comparable to the conventional assay for E. coli colonies. With these two novel techniques, we have successfully achieved the expression of hirudin, an antithrombin agent, in Pichia pastoris. The secreted hirudin maintains a biological activity of 82 antithrombian units per milliliter supernatant from the media.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Zusammenfassung
Transformation procedure by electroporation reaching 2800 transformants/microgram DNA for Pichia pastoris; expression of hirudin in P.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie berichtet über verbesserte Methoden zur genetischen Manipulation von Pichia pastoris – ein Elektroporationstransformationsprotokoll (bis zu 2.800 Transformanden/Mikrogramm DNA) und einen Kolonie-PCR-Assay – und wendet diese an, um Hirudin, ein Antithrombin-Agens, exprimiert mit 82 Antithrombin-Einheiten pro Milliliter Kulturüberstand, zu exprimieren. Dies ist für ASH direkt relevant, weil Hirudin das kanonische Antikoagulans des medizinischen Blutegelspeichels und ein definierendes Molekül des Blutegelsekretoms ist, das die antikoagulatorischen Effekte der Blutegeltherapie untermauert; rekombinante Produktionsplattformen sind wichtig, um verlässliche Quellen von Hirudin und Hirudin-basierten Therapeutika für Forschung und klinische Anwendung zu ermöglichen. Eine Einschränkung: Dies ist eine Bioprozess-/Expressionsstudie, keine klinische oder In-vivo-Wirksamkeitsstudie, und die berichtete Aktivität spiegelt die Expressionsausbeute im Kulturüberstand wider und nicht die Leistung des gereinigten Produkts oder einen Vergleich mit nativem, aus Blutegeln stammendem Hirudin.
Zitation
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026