Isolation of recombinant hirudin by preparative high-performance liquid chromatography
Research article published in J Chromatogr (1989)
Abstract
The purification of recombinant hirudin variant 2-Lys47 (rHV2-Lys47), produced by a genetically engineered yeast strain, is described. rHV2-Lys47 expressed and secreted into the culture medium was the starting material for the purification process of hirudin from the culture broth after cell harvesting by centrifugation. Initial purification of the product by preparative reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) using step-gradient elution, followed by precipitation of rHV2-Lys47 in the presence of acetone, removed most of the contaminants from the culture medium. The pure product was obtained by successive preparative anion-exchange and reversed-phase HPLC on silica based stationary phases. Characterization of the final product by analytical HPLC, isoelectric focusing gel electrophoresis, quantitative amino acid composition and sequence analysis did not reveal any contaminants. Liquid secondary ion mass spectrometry was used to confirm its primary structure. The isolated product was tested in an inhibition assay of human alpha-thrombin and proved to be fully active.
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Zusammenfassung
Three-step HPLC purification of recombinant hirudin variant 2-Lys47 from yeast culture broth; pure product fully active in human alpha-thrombin inhibition assay.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Dieser Artikel beschreibt die Aufreinigung der rekombinanten Hirudin-Variante 2-Lys47 (rHV2-Lys47), die durch einen gentechnisch veränderten Hefestamm produziert wurde, mittels sequenzieller präparativer Umkehrphasen- und Anionenaustausch-HPLC-Schritten. Das Endprodukt wurde mittels analytischer HPLC, isoelektrischer Fokussierung, Aminosäurezusammensetzungsanalyse, Sequenzanalyse und Massenspektrometrie als rein bestätigt und zeigte volle Aktivität in einem humanen Alpha-Thrombin-Inhibitionsassay. Hirudin wird im Abstract direkt als Zielprotein referenziert, was dies für die Produktion und Qualitätskontrolle dieses antikoagulatorischen Proteins relevant macht. EINSCHRÄNKUNG: Es handelt sich um eine Studie aus dem Bereich Bioprozess-Engineering und Proteinchemie, die ein rekombinantes, in Hefe produziertes Protein betrifft und nicht aus Blutegeln gewonnenes Material; sie umfasst weder Blutegel noch eine Hirudotherapie-Anwendung noch In-vivo-Daten.
Zitation
Isolation of recombinant hirudin by preparative high-performance liquid chromatography.
Bischoff R et al. · J Chromatogr, 1989
Verwandter klinischer Kontext
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026