Functional phage display of leech-derived tryptase inhibitor (LDTI): construction of a library and selection of thrombin inhibitors
Research article published in FEBS letters (1999)
Abstract
The recombinant phage antibody system pCANTAB 5E has been used to display functionally active leech-derived tryptase inhibitor (LDTI) on the tip of the filamentous M13 phage. A limited combinatorial library of 5.2 x 10(4) mutants was created with a synthetic LDTI gene, using a degenerated oligonucleotide and the pCANTAB 5E phagemid. The mutations were restricted to the P1-P4' positions of the reactive site. Fusion phages and appropriate host strains containing the phagemids were selected after binding to thrombin and DNA sequencing. The variants LDTI-2T (K8R, I9V, S10, K11W, P12A), LDTI-5T (K8R, I9V, S10, K11S, P12L) and LDTI-10T (K8R, I9L, S10, K11D, P12I) were produced with a Saccharomyces cerevisiae expression system. The new inhibitors, LDTI-2T and -5T, prolong the blood clotting time, inhibit thrombin (Ki 302 nM and 28 nM) and trypsin (Ki 6.4 nM and 2.1 nM) but not factor Xa, plasma kallikrein or neutrophil elastase. The variant LDTI-10T binds to thrombin but does not inhibit it. The relevant reactive site sequences of the thrombin inhibiting variants showed a strong preference for arginine in position P1 (K8R) and for valine in P1' (I9V). The data indicate further that LDTI-5T might be a model candidate for generation of active-site directed thrombin inhibitors and that LDTI in general may be useful to generate specific inhibitors suitable for a better understanding of enzyme-inhibitor interactions.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
The recombinant phage antibody system pCANTAB 5E has been used to display functionally active leech-derived tryptase inhibitor (LDTI) on the tip of the filamentous M13 phage.
Почему это важно для гирудотерапии
В данном исследовании методом функционального фагового дисплея ингибитор триптазы пиявочного происхождения (LDTI) был экспонирован на поверхности фага M13, а также создана комбинаторная библиотека из приблизительно 52 000 мутантов с вариациями в положениях P1–P4' реактивного центра. После селекции на тромбин в дрожжевой системе были получены три варианта: LDTI-2T и LDTI-5T ингибировали тромбин (Ki 302 нМ и 28 нМ соответственно) и пролонгировали время свёртывания крови, тогда как LDTI-10T связывал, но не ингибировал тромбин. Результаты выявили выраженное предпочтение аргинина в позиции P1 и валина в позиции P1' для ингибирования тромбина, при этом LDTI-5T был определён как модельный кандидат для создания ингибиторов тромбина, направленных к активному центру. Это релевантно для области ASH, поскольку в работе непосредственно модифицируется ингибиторный каркас пиявочного происхождения для придания новой тромбин-ингибирующей активности. Оговорка состоит в том, что это исследование по молекулярной инженерии in vitro, в аннотации которого не приведены данные экспериментов на животных или клинические данные.
Цитирование
Functional phage display of leech-derived tryptase inhibitor (LDTI): construction of a library and selection of thrombin inhibitors
Tanaka AS et al. · FEBS letters, 1999
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.