Функциональный фаговый дисплей выделенного из пиявок ингибитора триптазы (LDTI): создание библиотеки и отбор ингибиторов тромбина

The recombinant phage antibody system pCANTAB 5E has been used to display functionally active leech-derived tryptase inhibitor (LDTI) on the tip of the filamentous M13 phage. A limited combinatorial library of 5.2 x 10(4) mutants was created with a synthetic LDTI gene, using a degenerated oligonucleotide and the pCANTAB 5E phagemid. The mutations were restricted to the P1-P4' positions of the reactive site. Fusion phages and appropriate host strains containing the phagemids were selected after binding to thrombin and DNA sequencing. The variants LDTI-2T (K8R, I9V, S10, K11W, P12A), LDTI-5T (K8R, I9V, S10, K11S, P12L) and LDTI-10T (K8R, I9L, S10, K11D, P12I) were produced with a Saccharomyces cerevisiae expression system. The new inhibitors, LDTI-2T and -5T, prolong the blood clotting time, inhibit thrombin (Ki 302 nM and 28 nM) and trypsin (Ki 6.4 nM and 2.1 nM) but not factor Xa, plasma kallikrein or neutrophil elastase. The variant LDTI-10T binds to thrombin but does not inhibit it. The relevant reactive site sequences of the thrombin inhibiting variants showed a strong preference for arginine in position P1 (K8R) and for valine in P1' (I9V). The data indicate further that LDTI-5T might be a model candidate for generation of active-site directed thrombin inhibitors and that LDTI in general may be useful to generate specific inhibitors suitable for a better understanding of enzyme-inhibitor interactions.

Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.

Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.

Ингибитор триптазы из пиявки (LDTI) функционально экспонирован на фаге M13; на основе синтетического гена создана библиотека из 5,2 × 10⁴ мутантов (вариации в P1–P4'). После отбора по связыванию с тромбином получены варианты LDTI-2T, -5T и -10T. LDTI-2T и -5T ингибировали тромбин (Ki 302 и 28 нМ) и трипсин (Ki 6,4 и 2,1 нМ), но не фактор Xa, плазменный калликреин и нейтрофильную эластазу; LDTI-10T лишь связывался с тромбином. LDTI-5T может служить моделью для создания ингибиторов тромбина, направленных к активному центру.

Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой

Другие рецензируемые исследования в разделе «Разработка лекарственных препаратов».

• Гирудотерапия в медицине и стоматологии — Jha K et al. (2015)
• Лечение пиявками: история — Hyson J (2005)
• Гирудины азиатской медицинской пиявки Hirudinaria manillensis: те же, но другие — Lukas P et al. (2019)
• Транскриптомный анализ слюнной железы медицинской пиявки Hirudo nipponia — Lu Z et al. (2018)
• Молекулярно-динамические и фармакологические исследования вариантов гирудина Hirudinaria manillensis и Hirudo medicinalis, созданных методами белковой инженерии — Sun Y et al. (2022)
• Бесклеточный синтез варианта 1 гирудина кровососущей пиявки Hirudo medicinalis — Wüstenhagen D et al. (2020)
• Получение вариантов гирудина с помощью генно-инженерной микробной фабрики — Zhang J, Lan N (2018)
• Гирудин при гепарин-индуцированной тромбоцитопении — Lubenow N, Greinacher A (2002)
• Гирудин ослабляет диабетическую нефропатию путём ингибирования Gsdmd-опосредованного пироптоза — Han J et al. (2023)
• Гирудин как альтернативный антикоагулянт: исторический обзор — Markwardt F (2002)

Все исследования, проанализированные ASH →