Зависимое от мембраны взаимодействие фактора Xa и протромбина с фактором Va в протромбиназном комплексе

Because all three protein components of prothrombinase, factors (f) Xa and Va and prothrombin, bind to negatively charged membrane phospholipids, the exact role of the membrane in the prothrombinase reaction has not been fully understood. In this study, we prepared deletion derivatives of fXa and prothrombin in which both the Gla and first EGF-like domains of the protease (E2-fXa) as well as the Gla and both kringle domains of the substrate (prethrombin-2) had been deleted. The fVa-mediated catalytic activity of E2-fXa toward prethrombin-2 was analyzed in both the absence and presence of phospholipids composed of 80% phosphatidylcholine (PC) and 20% phosphatidylserine (PS). PCPS markedly accelerated the initial rate of prethrombin-2 activation by E2-fXa, with the cofactor exhibiting saturation only in the presence of phospholipids (apparent K(d) of approximately 60 nM). Competitive kinetic studies in the presence of the two exosite-1-specific ligands Tyr(63)-sulfated hirudin(54-65) and TM456 suggested that while both peptides are highly effective inhibitors of the fVa-mediated activation of prethrombin-2 by E2-fXa in the absence of PCPS, they are ineffective competitors in the presence of phospholipids. Since neither E2-fXa nor prethrombin-2 can interact with membranes, these results suggest that interaction of fVa with PCPS improves the affinity of the activation complex for proexosite-1 of the substrate. Direct binding studies employing OG(488)-EGR-labeled fXa and E2-fXa revealed that the interaction of the Gla domain of fXa with PCPS also induces conformational changes in the protease to facilitate its high-affinity interaction with fVa.

Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.

Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.

Роль отрицательно заряженных мембранных фосфолипидов в реакции протромбиназы оставалась неясной. Авторы получили делеционные производные: E2-fXa без Gla-домена и первого EGF-подобного домена, претромбин-2 — без Gla-домена и обоих кринглов. Фосфолипиды PCPS (80% фосфатидилхолина, 20% фосфатидилсерина) резко ускоряли активацию претромбина-2 ферментом E2-fXa; насыщение фактором Va наблюдалось только в их присутствии (кажущаяся K(d) ≈ 60 нМ). Экзосайт-1-специфические лиганды Tyr(63)-сульфатированный гирудин(54-65) и TM456 эффективны без PCPS, но неэффективны в его присутствии; авторы предполагают, что связывание фактора Va с PCPS повышает сродство комплекса к проэкзосайту-1 субстрата.

Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой

Другие рецензируемые исследования в разделе «Разработка лекарственных препаратов».

• Гирудотерапия в медицине и стоматологии — Jha K et al. (2015)
• Лечение пиявками: история — Hyson J (2005)
• Гирудины азиатской медицинской пиявки Hirudinaria manillensis: те же, но другие — Lukas P et al. (2019)
• Транскриптомный анализ слюнной железы медицинской пиявки Hirudo nipponia — Lu Z et al. (2018)
• Молекулярно-динамические и фармакологические исследования вариантов гирудина Hirudinaria manillensis и Hirudo medicinalis, созданных методами белковой инженерии — Sun Y et al. (2022)
• Бесклеточный синтез варианта 1 гирудина кровососущей пиявки Hirudo medicinalis — Wüstenhagen D et al. (2020)
• Получение вариантов гирудина с помощью генно-инженерной микробной фабрики — Zhang J, Lan N (2018)
• Гирудин при гепарин-индуцированной тромбоцитопении — Lubenow N, Greinacher A (2002)
• Гирудин ослабляет диабетическую нефропатию путём ингибирования Gsdmd-опосредованного пироптоза — Han J et al. (2023)
• Гирудин как альтернативный антикоагулянт: исторический обзор — Markwardt F (2002)

Все исследования, проанализированные ASH →