Кинетика ингибирования тромбина гирудином
Kinetics of the inhibition of thrombin by hirudin
Экспериментальное исследование in vitro в журнале Biochemistry (1986)
Аннотация
The dissociation constant for hirudin was determined by varying the concentration of hirudin in the presence of a fixed concentration of thrombin and tripeptidyl p-nitroanilide substrate. The estimate of the dissociation constant determined in this manner displayed a dependence on the concentration of substrate which suggested the existence of two binding sites at which the substrate was able to compete with hirudin. A high-affinity site could be correlated with the binding of the substrate at the active site, and the other site had an affinity for the substrate that was 2 orders of magnitude lower. Extrapolation to zero substrate concentration yielded a value of 20 fM for the dissociation constant of hirudin at an ionic strength of 0.125. The dissociation constant for hirudin was markedly dependent on the ionic strength of the assay; it increased 20-fold when the ionic strength was increased from 0.1 to 0.4. This increase in dissociation constant was accompanied by a decrease in the rate with which hirudin associated with thrombin. This rate could be measured with a conventional recording spectrophotometer at higher ionic strength and was found to be independent of the binding of substrate at the active site.
Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.
Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.
Резюме
В работе исследована кинетика связывания гирудина с тромбином при варьировании концентрации гирудина и трипептидил-п-нитроанилидного субстрата. Оценка константы диссоциации зависела от концентрации субстрата, что указывало на два участка, за которые субстрат конкурирует с гирудином: высокоаффинный, соотносимый с активным центром, и второй, с аффинностью на два порядка ниже. Экстраполяция к нулевой концентрации субстрата дала константу диссоциации 20 фМ при ионной силе 0,125. При повышении ионной силы с 0,1 до 0,4 константа возрастала в 20 раз, а скорость ассоциации снижалась.
Почему это важно для гирудотерапии
В данном исследовании количественно оценена кинетика связывания гирудина и тромбина: сообщается о константе диссоциации 20 фМ при ионной силе 0,125 и показано, что данная константа увеличивалась в 20 раз при повышении ионной силы с 0,1 до 0,4, что сопровождалось снижением скорости ассоциации. Результаты также указали на наличие двух субстратно-конкурентных сайтов связывания на тромбине. Поскольку гирудин является мощным ингибитором тромбина, имеющим прямое отношение к антикоагулянтным механизмам, лежащим в основе гирудотерапии, эти точные кинетические параметры предоставляют фундаментальные биохимические данные о данном молекулярном взаимодействии. Однако данная работа ограничена измерениями кинетики связывания in vitro на очищенных препаратах, выполненными с помощью спектрофотометра; она не содержит физиологического или клинического контекста, не предполагает использования пиявок или слюнных секретов, и её связь с терапевтической практикой является косвенной.
Связанные соединения в реестре ASH
Молекулы из пиявки и препараты на основе гирудина, связанные с темой данной статьи; у каждого есть полный профиль в реестре соединений ASH:
Цитирование
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Похожие исследования
Другие рецензируемые исследования в разделе «Разработка лекарственных препаратов».
- Гирудотерапия в медицине и стоматологии — Jha K et al. (2015)
- Лечение пиявками: история — Hyson J (2005)
- Гирудины азиатской медицинской пиявки Hirudinaria manillensis: те же, но другие — Lukas P et al. (2019)
- Транскриптомный анализ слюнной железы медицинской пиявки Hirudo nipponia — Lu Z et al. (2018)
- Молекулярно-динамические и фармакологические исследования вариантов гирудина Hirudinaria manillensis и Hirudo medicinalis, созданных методами белковой инженерии — Sun Y et al. (2022)
- Бесклеточный синтез варианта 1 гирудина кровососущей пиявки Hirudo medicinalis — Wüstenhagen D et al. (2020)
- Получение вариантов гирудина с помощью генно-инженерной микробной фабрики — Zhang J, Lan N (2018)
- Гирудин при гепарин-индуцированной тромбоцитопении — Lubenow N, Greinacher A (2002)
- Гирудин ослабляет диабетическую нефропатию путём ингибирования Gsdmd-опосредованного пироптоза — Han J et al. (2023)
- Гирудин как альтернативный антикоагулянт: исторический обзор — Markwardt F (2002)
Добавлено в библиотеку ASH: 18 марта 2026 г. · Последнее обновление сайта: 1 ноября 2026 г.