Structure-function and refolding studies of the thrombin-specific inhibitor hirudin
Research article published in Haemostasis (1991)
Abstract
We have developed a novel expression and purification system that yields recombinant desulfo-hirudin (HV-1) with high specific activity (10,000 antithrombin units/mg) and an inhibition constant (Ki) for human alpha-thrombin of 0.2 pM. Reduced and denatured hirudin rapidly refolds to the native, fully active conformation at high concentration (greater than 50 mg/ml) by incubation at pH 10. Analytical gel filtration studies at neutral pH suggest that hirudin is a multimer. Initial binding of hirudin to thrombin appears to be followed by dissociation of the hirudin multimer to give a tight-binding 1:1 hirudin:thrombin complex. Thrombin inhibition studies showed that hirudin synthetic peptide fragments 42-65 and 51-65 [but not (Ala22)-6-28, containing two of the three disulfide bonds formed in native hirudin] were similarly effective in inhibiting thrombin cleavage of fibrinogen (IC50 = 4.9 and 6.0 microM, respectively, at a thrombin concentration of 1 microM). We conclude that hirudin has unusual structural and refolding properties and that its mechanism of inhibition involves noncovalent interaction with multiple sites on thrombin. The interaction of hirudin (specifically the region of Lys-47) with the basic specificity pocket of thrombin may contribute to the binding but is not essential for its inhibitory activity.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
Structure-function and refolding studies of the thrombin-specific inhibitor hirudin.
Почему это важно для гирудотерапии
Аннотация описывает новую систему экспрессии и очистки, позволяющую получать рекомбинантный десульфо-гирудин (HV-1) с высокой удельной активностью (10 000 антитромбиновых единиц/мг) и Ki для человеческого альфа-тромбина, равным 0,2 пМ, а также исследования рефолдинга, мультимеризации и ингибирования тромбина пептидными фрагментами (42–65, 51–65). Работа характеризует необычные структурные свойства и свойства рефолдинга гирудина, а также его многосайтовый нековалентный механизм ингибирования тромбина. В самой аннотации гирудин не идентифицируется как продукт пиявочного происхождения, пиявки не упоминаются, секретом пиявок не фигурирует; таким образом, релевантность для ASH или гирудотерапии может быть выведена лишь из общих представлений о происхождении гирудина. Это строго биохимическое исследование in vitro с использованием рекомбинантного белка и синтетических фрагментов.
Цитирование
Structure-function and refolding studies of the thrombin-specific inhibitor hirudin
Johnson PH et al. · Haemostasis, 1991
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.