Vía cinética de la transición lenta a rápida de la trombina. Evidencia de unión acoplada de ligandos en dominios estructuralmente distintos

The kinetic pathway for the Na+-induced slow --> fast transition of thrombin was characterized. The slow form was shown to consist of two conformers in a 3:1 ratio (ES2:ES1) at 5 degrees C, pH 7.4, Gamma/2 0.3. ES2 binds Na+ 3 orders of magnitude faster than does ES1. The small molecule active site-directed inhibitor L-371,912, and the exosite I binding ligand hirugen, like Na+, bind selectively to ES2 and induce the slow --> fast conversion of thrombin. The slow --> fast transition is limited by the rate of conversion of ES1 to ES2 (k approximately 28 s-1 at 5 degrees C). Replacement of Arg-221a or Lys-224 at the Na+ binding site with Ala appears to selectively alter the slow form and reduce the apparent affinity of the mutants for Na+ and L-371,912. This replacement, however, has little effect on the affinity for the inhibitor in the presence of saturating concentrations of Na+. The kinetically linked ligand binding at the Na+ binding site, exosite I, and the active site of thrombin characterized in the present study indicates the basis for the plasticity of this important enzyme, and suggests the possibility that the substrate specificity and, therefore, the procoagulant and anticoagulant activities of thrombin may be subject to allosteric regulation by as yet unidentified physiologically important effectors.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

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Se caracterizó la vía cinética de la transición lenta a rápida de la trombina inducida por Na⁺. La forma lenta consta de dos confórmeros en proporción 3:1 (ES2:ES1); ES2 une Na⁺ tres órdenes de magnitud más rápido que ES1; la conversión ES1→ES2 limita la transición (k ≈ 28 s⁻¹). Sustituir Arg-221a o Lys-224 por Ala parece modificar la forma lenta y reducir la afinidad aparente por Na⁺ y L-371,912. Según los autores, la unión acoplada sustenta la plasticidad enzimática.

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