Cinética de la inhibición de la trombina por la hirudina

The dissociation constant for hirudin was determined by varying the concentration of hirudin in the presence of a fixed concentration of thrombin and tripeptidyl p-nitroanilide substrate. The estimate of the dissociation constant determined in this manner displayed a dependence on the concentration of substrate which suggested the existence of two binding sites at which the substrate was able to compete with hirudin. A high-affinity site could be correlated with the binding of the substrate at the active site, and the other site had an affinity for the substrate that was 2 orders of magnitude lower. Extrapolation to zero substrate concentration yielded a value of 20 fM for the dissociation constant of hirudin at an ionic strength of 0.125. The dissociation constant for hirudin was markedly dependent on the ionic strength of the assay; it increased 20-fold when the ionic strength was increased from 0.1 to 0.4. This increase in dissociation constant was accompanied by a decrease in the rate with which hirudin associated with thrombin. This rate could be measured with a conventional recording spectrophotometer at higher ionic strength and was found to be independent of the binding of substrate at the active site.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

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Se determinó la constante de disociación de la hirudina. Su dependencia de la concentración de sustrato sugirió 2 sitios de unión donde el sustrato compite con la hirudina; el de alta afinidad pudo correlacionarse con el centro activo y el otro tuvo una afinidad 2 órdenes de magnitud menor. Extrapolada a sustrato nulo, la constante fue de 20 fM a fuerza iónica 0,125. Aumentó 20 veces al subir la fuerza iónica de 0,1 a 0,4, con menor velocidad de asociación.

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