Technical improvements in genetic manipulation of Pichia pastoris and their application in hirudin expression
Research article published in Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao (2001)
Abstract
Pichia pastoris has become an increasingly popular host for heterologous protein production. However, there is neither a high-efficient transformation method nor a fast colony-PCR assay for the yeast yet. In this paper, we report a transformation procedure by electroporation, which reaches the value of up to 2800 transformants/microgram DNA. By using a cold and heat treatment and a modified PCR buffer, we established a simple and reliable colony-PCR protocol to detect recombinant P. pastoris clones, which is comparable to the conventional assay for E. coli colonies. With these two novel techniques, we have successfully achieved the expression of hirudin, an antithrombin agent, in Pichia pastoris. The secreted hirudin maintains a biological activity of 82 antithrombian units per milliliter supernatant from the media.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Resumen
Transformation procedure by electroporation reaching 2800 transformants/microgram DNA for Pichia pastoris; expression of hirudin in P.
Por qué esto importa para la hirudoterapia
Este estudio informa sobre métodos mejorados para la manipulación genética de Pichia pastoris —un protocolo de transformación por electroporación (hasta 2.800 transformantes/microgramo de ADN) y un ensayo de PCR de colonia— y los aplica para expresar hirudina, un agente antitrombina, secretada a 82 unidades de antitrombina por mililitro de sobrenadante de cultivo. Esto es directamente relevante para la ASH porque la hirudina es el anticoagulante canónico de la saliva de la sanguijuela medicinal y una molécula definitoria del secretoma de la sanguijuela que sustenta los efectos anticoagulantes de la terapia con sanguijuelas; las plataformas de producción recombinante son importantes para permitir suministros confiables de hirudina y terapéuticos basados en hirudina para investigación y uso clínico. Una salvedad: este es un estudio de bioproceso/expresión, no un estudio clínico o de eficacia in vivo, y la actividad informada refleja el rendimiento de expresión en el sobrenadante de cultivo en lugar del rendimiento del producto purificado o de la comparación con la hirudina nativa derivada de sanguijuela.
Citación
Contexto clínico relacionado
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Añadido a la biblioteca ASH: May 27, 2026 · Última actualización del sitio: 18 de junio de 2026