Bdelastasina, un inhibidor de serina proteasa de la familia de la antistasina de la sanguijuela medicinal (Hirudo medicinalis): estructura primaria, expresión en levaduras y caracterización del inhibidor nativo y recombinante

We have reported earlier the isolation and amino acid composition of bdellin A from medical leech, and characterised it as an inhibitor of trypsin, plasmin and acrosin [Fritz, H., Gebhardt, M., Meister, R. & Fink, E. (1971) in Proceedings of the international research conference on proteinase inhibitors (Fritz, H. & Tschesche, H., eds) pp. 271-280, Walter de Gruyter, Berlin]. In the present study, one of several chromatographic forms of this inhibitor was isolated from a semi-pure preparation. Elucidation of its amino acid sequence revealed that bdellin A is a member of the antistasin family. Therefore, it was renamed bdellastasin to avoid confusion with bdellin B, which is another trypsin-plasmin inhibitor from the medical leech, but of the Kazal type. Furthermore, a synthetic gene of bdellastasin was constructed, and the protein expressed in Saccharomyces cerevisiae with yields of 29 mg/l. The recombinant bdellastasin was purified by hydrophobic interaction and anion-exchange chromatography. Comparison by mass spectroscopy, far-ultraviolet circular dichroism studies, sequence determination, and inhibition characteristics demonstrated the identity of recombinant and native bdellastasin. The Ki values of bdellastasin for inhibition of bovine trypsin and human plasmin are in the nanomolar range; no inhibition was detected for factor Xa, thrombin, tissue kallikrein, plasma kallikrein and chymotrypsin. Circular dichroism analyses indicated that bdellastasin is devoid of secondary-structural elements.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

El resumen se deja sin traducir para conservar la redacción original de los autores.

Se aisló una forma cromatográfica de la bdelina A, que resultó ser miembro de la familia de la antistasina y se renombró bdelastasina. Un gen sintético se expresó en Saccharomyces cerevisiae (29 mg/l); la proteína recombinante fue idéntica a la nativa. Los valores de Ki para tripsina bovina y plasmina humana estuvieron en el rango nanomolar; no se detectó inhibición de factor Xa, trombina, calicreínas ni quimotripsina. El dicroísmo circular indicó que bdelastasina carece de elementos de estructura secundaria.

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