Rekombinantes Decorsin: Dynamik der RGD-Erkennungsstelle

Decorsin is an antagonist of integrin alphaIIbbeta3 and a potent platelet aggregation inhibitor. A synthetic gene encoding decorsin, originally isolated from the leech Macrobdella decora, was designed, constructed, and expressed in Escherichia coli. The synthetic gene was fused to the stII signal sequence and expressed under the transcriptional control of the E. coli alkaline phosphatase promoter. The protein was purified by size-exclusion filtration of the periplasmic contents followed by reversed-phase high-performance liquid chromatography. Purified recombinant decorsin was found to be indistinguishable from leech-derived decorsin based on amino acid composition, mass spectral analysis, and biological activity assays. Complete sequential assignments of 1H and proton bound 13C resonances were established. Stereospecific assignments of 21 of 25 nondegenerate b-methylene groups were determined. The RGD adhesion site recognized by integrin receptors was found at the apex of a most exposed hairpin loop. The dynamic behavior of decorsin was analyzed using several independent NMR parameters. Although the loop containing the RGD sequence is the most flexible one in decorsin, the conformation of the RGD site itself is more restricted than in other proteins with similar activities.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Die Autoren konstruierten ein synthetisches Gen für Decorsin, einen Integrin-αIIbβ3-Antagonisten aus dem Blutegel Macrobdella decora, und exprimierten es in Escherichia coli. Das aufgereinigte rekombinante Decorsin unterschied sich in Aminosäurezusammensetzung, Massenspektrum und biologischer Aktivität nicht von nativem Decorsin. Die RGD-Haftstelle fand sich an der Spitze einer exponierten Haarnadelschleife. Laut NMR-Dynamikanalyse ist diese Schleife die flexibelste des Proteins, doch die Konformation der RGD-Stelle selbst ist stärker eingeschränkt als bei anderen Proteinen mit ähnlicher Aktivität.

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