Kinetics of the inhibition of thrombin by hirudin
Research article published in Biochemistry (1986)
Abstract
The dissociation constant for hirudin was determined by varying the concentration of hirudin in the presence of a fixed concentration of thrombin and tripeptidyl p-nitroanilide substrate. The estimate of the dissociation constant determined in this manner displayed a dependence on the concentration of substrate which suggested the existence of two binding sites at which the substrate was able to compete with hirudin. A high-affinity site could be correlated with the binding of the substrate at the active site, and the other site had an affinity for the substrate that was 2 orders of magnitude lower. Extrapolation to zero substrate concentration yielded a value of 20 fM for the dissociation constant of hirudin at an ionic strength of 0.125. The dissociation constant for hirudin was markedly dependent on the ionic strength of the assay; it increased 20-fold when the ionic strength was increased from 0.1 to 0.4. This increase in dissociation constant was accompanied by a decrease in the rate with which hirudin associated with thrombin. This rate could be measured with a conventional recording spectrophotometer at higher ionic strength and was found to be independent of the binding of substrate at the active site.
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Zusammenfassung
The dissociation constant for hirudin was determined by varying the concentration of hirudin in the presence of a fixed concentration of thrombin and tripeptidyl p-nitroanilide substrate.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie quantifizierte die Bindungskinetik zwischen Hirudin und Thrombin und berichtete eine Dissoziationskonstante von 20 fM bei einer Ionenstärke von 0,125. Zudem zeigte sie, dass diese Konstante sich 20-fach erhöhte, wenn die Ionenstärke von 0,1 auf 0,4 anstieg, begleitet von einer verringerten Assoziationsrate. Die Ergebnisse deuteten ferner auf zwei substratkompetitive Bindungsstellen auf Thrombin hin. Da Hirudin ein potenter Thrombin-Inhibitor von unmittelbarer Bedeutung für die antikoagulatorischen Mechanismen ist, die der Hirudotherapie zugrunde liegen, liefern diese präzisen kinetischen Parameter grundlegende biochemische Details über diese molekulare Interaktion. Allerdings beschränkt sich diese Arbeit auf gereinigte In-vitro-Bindungskinetik-Messungen, die mit einem Spektrophotometer durchgeführt wurden; sie enthält keinen physiologischen oder klinischen Kontext, beinhaltet keine Blutegel oder Speichelsekrete und ihr Bezug zur therapeutischen Praxis ist indirekt.
Zitation
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: March 18, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: June 18, 2026