Structure-function and refolding studies of the thrombin-specific inhibitor hirudin
Research article published in Haemostasis (1991)
Abstract
We have developed a novel expression and purification system that yields recombinant desulfo-hirudin (HV-1) with high specific activity (10,000 antithrombin units/mg) and an inhibition constant (Ki) for human alpha-thrombin of 0.2 pM. Reduced and denatured hirudin rapidly refolds to the native, fully active conformation at high concentration (greater than 50 mg/ml) by incubation at pH 10. Analytical gel filtration studies at neutral pH suggest that hirudin is a multimer. Initial binding of hirudin to thrombin appears to be followed by dissociation of the hirudin multimer to give a tight-binding 1:1 hirudin:thrombin complex. Thrombin inhibition studies showed that hirudin synthetic peptide fragments 42-65 and 51-65 [but not (Ala22)-6-28, containing two of the three disulfide bonds formed in native hirudin] were similarly effective in inhibiting thrombin cleavage of fibrinogen (IC50 = 4.9 and 6.0 microM, respectively, at a thrombin concentration of 1 microM). We conclude that hirudin has unusual structural and refolding properties and that its mechanism of inhibition involves noncovalent interaction with multiple sites on thrombin. The interaction of hirudin (specifically the region of Lys-47) with the basic specificity pocket of thrombin may contribute to the binding but is not essential for its inhibitory activity.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Zusammenfassung
Structure-function and refolding studies of the thrombin-specific inhibitor hirudin.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Das Abstract beschreibt ein neuartiges Expressions- und Reinigungssystem, das rekombinantes Desulfo-Hirudin (HV-1) mit hoher spezifischer Aktivität (10.000 Antithrombin-Einheiten/mg) und einem Ki für humanes Alpha-Thrombin von 0,2 pM liefert, zusammen mit Untersuchungen zur Rückfaltung, Multimerisierung und Thrombinhemmung durch Peptidfragmente (42–65, 51–65). Die Arbeit charakterisiert die ungewöhnlichen Struktur- und Rückfaltungseigenschaften von Hirudin sowie seinen mehrere Bindungsstellen umfassenden, nichtkovalenten Mechanismus der Thrombinhemmung. Das Abstract selbst identifiziert Hirudin nicht als von Blutegeln stammend, erwähnt keine Blutegel und nimmt keinen Bezug auf das Blutegelsekretom; die Relevanz für die ASH oder die Hirudotherapie ist daher nur aus dem allgemeinen Wissen über den Ursprung von Hirudin ableitbar. Es handelt sich ausnahmslos um eine biochemische In-vitro-Studie unter Verwendung von rekombinantem Protein und synthetischen Fragmenten.
Zitation
Structure-function and refolding studies of the thrombin-specific inhibitor hirudin
Johnson PH et al. · Haemostasis, 1991
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026