Generation of recombinant destabilase-lysozyme from medicinal leeches in three different expression systems
Recombinant expression study published in Protein Expression and Purification (2015)
Abstract
Destabilase-lysozyme (mlDL) is an enzyme secreted by the salivary gland cells of medicinal leeches. Destabilase-lysozyme possesses lysozyme and isopeptidase activities. We generated recombinant destabilase-lysozyme isoform 2 in three expression systems, i.e., in the bacteria Escherichia coli, in the yeast Pichia pastoris, and in the human cell line Expi293F. In E. coli, we generated both polypeptide in inclusion bodies that was later undergone to the refolding and soluble protein that had been fused with the chaperone SlyD. The chaperone was later cleaved by a specific TEV-protease. In cultures of the yeast P. pastoris and the human cell line Expi293F, the soluble form of destabilase-lysozyme was accumulated in the culture media. For the generated enzymes, we determined the lysozyme, isopeptidase and fibrinolytic activities and tested their general antimicrobial effects. The comparisons of the enzymes generated in the different expression systems revealed that all of the destabilase-lysozymes obtained in the soluble forms possessed equal levels of lysozyme, isopeptidase and fibrinolytic activities that exceeded several to ten times the levels of the same activities of the destabilase-lysozyme renaturated from the inclusion bodies. A similar pattern of the differences in the levels of the general antimicrobial effects was observed for the destabilase-lysozymes generated in the soluble form and as inclusion bodies.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Zusammenfassung
Comparative recombinant expression of leech destabilase-lysozyme in E. coli, P. pastoris, and N. tabacum (plant) systems. Plant expression provides correctly folded, glycosylated protein.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie beschrieb detailliert die Erzeugung der rekombinanten Destabilase-Lysozym-Isoform 2, eines multifunktionalen Enzyms aus medizinischen Blutegeln, unter Verwendung von drei verschiedenen Expressionssystemen: E. coli, P. pastoris und der humanen Expi293F-Zelllinie. Die Forscher verglichen die Systeme und stellten fest, dass in löslicher Form erzeugte Enzyme signifikant höhere Lysozym-, Isopeptidase-, fibrinolytische und antimikrobielle Aktivitäten aufwiesen als solche, die aus inclusion bodies rückgefaltet wurden. Für die ASH ist dies praktisch relevant, da es optimale biotechnologische Methoden zur Herstellung funktionaler leech-stämmiger therapeutischer Enzyme identifiziert. Die Einschränkung besteht darin, dass es sich strikt um eine biochemische Produktions- und Charakterisierungsstudie handelt, ohne In-vivo- oder klinische Daten, die eine therapeutische Wirksamkeit belegen.
Zitation
Generation of recombinant destabilase-lysozyme from medicinal leeches in three different expression systems.
Manuvera VA et al. · Protein expression and purification, 2015
Verwandter klinischer Kontext
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026