Gewinnung von rekombinantem Destabilase-Lysozym aus medizinischen Blutegeln in drei verschiedenen Expressionssystemen

Destabilase-lysozyme (mlDL) is an enzyme secreted by the salivary gland cells of medicinal leeches. Destabilase-lysozyme possesses lysozyme and isopeptidase activities. We generated recombinant destabilase-lysozyme isoform 2 in three expression systems, i.e., in the bacteria Escherichia coli, in the yeast Pichia pastoris, and in the human cell line Expi293F. In E. coli, we generated both polypeptide in inclusion bodies that was later undergone to the refolding and soluble protein that had been fused with the chaperone SlyD. The chaperone was later cleaved by a specific TEV-protease. In cultures of the yeast P. pastoris and the human cell line Expi293F, the soluble form of destabilase-lysozyme was accumulated in the culture media. For the generated enzymes, we determined the lysozyme, isopeptidase and fibrinolytic activities and tested their general antimicrobial effects. The comparisons of the enzymes generated in the different expression systems revealed that all of the destabilase-lysozymes obtained in the soluble forms possessed equal levels of lysozyme, isopeptidase and fibrinolytic activities that exceeded several to ten times the levels of the same activities of the destabilase-lysozyme renaturated from the inclusion bodies. A similar pattern of the differences in the levels of the general antimicrobial effects was observed for the destabilase-lysozymes generated in the soluble form and as inclusion bodies.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Rekombinantes Destabilase-Lysozym (mlDL) des medizinischen Blutegels, Isoform 2, wurde in drei Expressionssystemen hergestellt: in Escherichia coli (als Einschlusskörperchen bzw. löslich, fusioniert mit dem Chaperon SlyD), in der Hefe Pichia pastoris und in der humanen Zelllinie Expi293F. Für die Enzyme wurden Lysozym-, Isopeptidase- und fibrinolytische Aktivität sowie antimikrobielle Wirkung bestimmt. Alle löslichen mlDL-Formen besaßen gleich hohe Aktivitäten und übertrafen die der aus Einschlusskörperchen renaturierten mlDL um das Mehrfache bis Zehnfache; bei den antimikrobiellen Effekten zeigte sich ein ähnliches Muster.

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