Neubewertung der Wirkung von Cholesterinsulfat auf die Blutgerinnung und Fibrinolyse: Hemmung von humanem Thrombin und anderen humanen Blutproteasen

Cholesteryl sulfate (CS) was quantitatively synthesized by microwave-assisted sulfonation of cholesterol followed by sodium exchange chromatography. In vitro effects of CS on human thrombin and other serine proteases of the coagulation and fibrinolysis processes were investigated using a series of biochemical and biophysical techniques. CS was found to inhibit thrombin with an IC50 value of 140.8 ± 21.8 μM at pH 7.4 and 25 ○C. Michaelis-Menten kinetics indicated that thrombin inhibition by CS is non-competitive (allosteric) in nature. Fluorescence-based binding studies indicated that CS binds to thrombin with a KD value of 180.9 ± 18.9 μM. Given the lack of competition with heparins and a hirudin peptide in competitive inhibition assays, it appears that CS does not bind to thrombin's exosites 1 or 2 and it rather recognizes a different allosteric exosite. CS was found to partially inhibit thrombin-mediated fibrinogen activation with an IC50 value of 175.5 ± 17.5 μM and efficacy of ∼26.0 ± 6.6%. Likewise, CS selectively doubled the activated partial thromboplastin time with EC2x of 521 μM. Interestingly, CS was found to also inhibit factors Xa and XIa as well as plasmin with IC50 values of ∼85-250 μM and efficacy of 94-100%. Nevertheless, CS most potently inhibited factor XIIa with an IC50 Value of ∼17 μM and efficacy of 60%. Surprisingly, CS did not inhibit factor IXa. These results encourage further in vitro and in vivo investigation of CS to better understand its (patho-) physiological roles in coagulation and hemostasis.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Cholesterinsulfat (CS) wurde mittels mikrowellenassistierter Sulfonierung synthetisiert und in vitro auf Serinproteasen der Gerinnung und Fibrinolyse getestet. CS hemmte Thrombin nicht-kompetitiv (allosterisch; IC50 140,8 ± 21,8 μM) und band mit KD 180,9 ± 18,9 μM, offenbar ohne Bindung an Exosite 1 oder 2. Es hemmte partiell die Fibrinogenaktivierung (IC50 175,5 ± 17,5 μM), verdoppelte die aPTT und hemmte FXa, FXIa und Plasmin (IC50 ~85–250 μM), besonders FXIIa (~17 μM), nicht jedoch FIXa. Die Autoren regen weitere In-vitro- und In-vivo-Untersuchungen an.

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