Overcoming Heparin-Associated RT-qPCR Inhibition and Normalization Issues for microRNA Quantification in Patients with Acute Myocardial Infarction
Methodology / validation published in Thromb Haemost (2018)
Abstract
BACKGROUND: Cardiac-enriched micro ribonucleic acids (miRNAs) are released into the circulation following ST-elevation myocardial infarction (STEMI). Lack of standardized approaches for reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR) data normalization and presence of RT-qPCR inhibitors (e.g. heparin) in patient blood samples have prevented reproducible miRNA quantification in this cohort and subsequent translation of these biomarkers to clinical practice. MATERIALS AND METHODS: Using a RT-qPCR miRNA screening platform, we identified and validated an endogenous circulating miRNA as a normalization control. In addition, we assessed the effects of in vivo and in vitro anticoagulant drugs administration (heparin and bivalirudin) on three RT-qPCR normalization strategies (global miRNA mean, exogenous spike-in control [cel-miR-39] and endogenous miRNA control). Finally, we evaluated the effect of heparin and its in vitro inhibition with heparinase on the quantification of cardiac-enriched miRNAs in STEMI patients. RESULTS: miR-425-5p was validated as an endogenous miRNA control. Heparin administration in vitro and in vivo inhibited all RT-qPCR normalization strategies. In contrast, bivalirudin had no effects on cel-miR-39 or miR-425-5p quantification. In vitro RNA sample treatment with 0.3 U of heparinase overcame heparin-induced over-estimation of cardiac-enriched miRNA levels and improved their correlation with high-sensitivity troponin T. CONCLUSION: miRNA quantification in STEMI patients receiving heparin is jeopardized by its effect on all RT-qPCR normalization approaches. Use of samples from bivalirudin-treated patients or in vitro treatment of heparin-contaminated samples with heparinase are suitable alternatives for miRNA quantification in this cohort. Finally, we reinforce the evidence that cardiac-enriched miRNAs early after myocardial reperfusion reflect the severity of cardiac injury.
Abstract sourced from PubMed (NCBI) for the cited record. See the original publication for the authoritative version.
Резюме
RT-qPCR miRNA-quantification methodology study showing bivalirudin (leech-derived DTI) does not inhibit RT-qPCR reactions unlike heparin. Bivalirudin-treated samples enable accurate cardiac-miRNA biomarker quantification in STEMI patients.
Почему это важно для гирудотерапии
В этом исследовании по валидации изучалось, как антикоагулянтные препараты — в частности, гепарин и бивалирудин — влияют на количественное определение микроРНК на основе ОТ-ПЦР в реальном времени (RT-qPCR) в образцах крови пациентов с инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST (STEMI), в результате чего miR-425-5p была определена как эндогенный контроль нормализации, и было продемонстрировано, что обработка гепариназой или использование образцов, обработанных бивалирудином, может преодолеть индуцированное гепарином ингибирование RT-qPCR. В аннотации в качестве изучаемых антикоагулянтов обсуждаются гепарин и бивалирудин, но не упоминаются гирудин, пиявки или любые вещества, производные от пиявок. Следовательно, на основе одной только аннотации нет обоснованной связи с гирудотерапией или секретом пиявок, а любая связь со сферой деятельности ASH в лучшем случае была бы косвенной. Исследование представляет собой методологическую валидацию, направленную на улучшение измерения биомаркеров miRNA у кардиологических пациентов.
Цитирование
Overcoming Heparin-Associated RT-qPCR Inhibition and Normalization Issues for microRNA Quantification in Patients with Acute Myocardial Infarction.
Coelho-Lima J et al. · Thrombosis and haemostasis, 2018
Связанный клинический контекст
Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой
Добавлено в библиотеку ASH: May 27, 2026 · Последнее обновление сайта: 18 июня 2026 г.