Экспрессия и кинетическая характеристика ингибиторов химотрипсина 1a и 1b из ячменя

The genes for chymotrypsin inhibitors 1a and 1b (CI-1a and CI-1b) from barley have been expressed in E. coli, and the CI-1a and CI-1b proteins purified. These proteins, although highly homologous, differ in the active site region at P2, P1' and P3' (Schechter and Berger nomenclature), and so might be expected to have differing specificities. Despite this, analysis of the inhibition kinetics showed that each displayed very similar kinetic behaviour when tested against a range of proteinases. The specificity of the CI-1 proteins is different to that of the other main barley inhibitor, CI-2, and Ki values are found to follow the series subtilisin Carlsberg < neutrophil elastase approximately subtilisin BPN' << chymotrypsin. Only very weak inhibition is found of trypsin, and pancreatic elastase is not measurably inhibited. For the proteinases inhibited most strongly, characteristic slow-binding inhibition kinetics were observed, whereas classical inhibition applied to the weaker interactions. The results are consistent with the major determinant of specificity being the P1 residue of the inhibitor, which is the same in both CI-1a and CI-1b. Consistent with this, is the similar spectrum of specificity found for the homologous inhibitor eglin c from leech, which has the same P1 residue. Both the CI-1 proteins are found to be less stable than CI-2, with CI-1a being significantly less stable than CI-1b as measured by guanidinium hydrochloride unfolding experiments. Possible reasons for the reduced stability are discussed in view of the sequence differences between CI-1a, CI-1b and CI-2.

Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.

Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.

Ингибиторы химотрипсина ячменя CI-1a и CI-1b экспрессированы в E. coli; сопоставлены кинетика и стабильность белков. Несмотря на различия в области активного центра (P2, P1′, P3′), кинетическое поведение ингибиторов сходно; специфичность определяется, по-видимому, одинаковым у них остатком P1 — как и у выделенного из пиявок эглина c. Ki возрастали в ряду субтилизин Карлсберг < нейтрофильная эластаза ≈ субтилизин BPN′ << химотрипсин; трипсин угнетался очень слабо, панкреатическая эластаза — неизмеримо. CI-1 менее стабильны, чем CI-2, причем CI-1a — заметно меньше, чем CI-1b, по данным денатурации гидрохлоридом гуанидина.

Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой

Другие рецензируемые исследования в разделе «Фармакология секрета слюнных желёз».

• Медицинские пиявки и гирудотерапия — Gödekmerdan A et al. (2011)
• Перекисное окисление липидов слюны у пациентов с постковидным синдромом на фоне гирудотерапии — Serikbayeva S et al. (2024)
• Лечение медицинскими пиявками при болевых синдромах: нарративный обзор — Koeppen D, Aurich M, Rampp T (2014)
• Иммуномодулирующие эффекты экстракта слюны медицинской пиявки на активированные макрофаги in vitro — Ayhan H et al. (2024)
• Ингибиторы протеиназ медицинской пиявки Hirudo medicinalis — Baskova I, Zavalova L (2001)
• Полифункциональность дестабилазы — лизоцима медицинской пиявки — Baskova I, Zavalova L (2008)
• «Удвоение»: идентификация и характеристика тандем-гирудина из азиатской медицинской пиявки Hirudinaria manillensis — Lukas P et al. (2022)
• Применение медицинской пиявки в лечении заболеваний уха — Seleznev K et al. (1992)
• Рекомбинантная дестабилаза из Hirudo medicinalis способна растворять тромбы человека in vitro — Bobrovsky P et al. (2021)
• Влияние рассеяния углеродных нанотрубок в окружающей среде на водного беспозвоночного Hirudo medicinalis — Girardello R et al. (2015)

Все исследования, проанализированные ASH →