Análisis transcriptómico de la influencia de la asimilación de metanol sobre la expresión génica en Pichia pastoris recombinante productora de la variante 3 de hirudina

Hirudin and its variants, as strong inhibitors against thrombin, are present in the saliva of leeches and are recognized as potent anticoagulants. However, their yield is far from the clinical requirement up to now. In this study, the production of hirudin variant 3 (HV3) was successfully realized by cultivating the recombinant Pichia pastoris GS115/pPIC9K-hv3 under the regulation of the promoter of AOX1 encoding alcohol oxidase (AOX). The antithrombin activity in the fermentation broth reached the maximum value of 5000 ATU/mL. To explore an effective strategy for improving HV3 production in the future, we investigated the influence of methanol assimilation on the general gene expression in this recombinant by transcriptomic study. The results showed that methanol was partially oxidized into CO2, and the rest was converted into glycerone-P which subsequently entered into central carbon metabolism, energy metabolism, and amino acid biosynthesis. However, the later metabolic processes were almost all down-regulated. Therefore, we propose that the up-regulated central carbon metabolism, energy, and amino acid metabolism should be beneficial for methanol assimilation, which would accordingly improve the production of HV3.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

El resumen se deja sin traducir para conservar la redacción original de los autores.

La hirudina, anticoagulante de la saliva de sanguijuelas, no alcanza el rendimiento de producción clínicamente requerido. Con Pichia pastoris recombinante bajo el promotor AOX1 se produjo la variante 3 (HV3), alcanzando una actividad antitrombina máxima de 5000 ATU/ml. El metanol se oxida parcialmente a CO2 y el resto se convierte en glicerona-P; las rutas posteriores quedaron casi todas reguladas a la baja. Los autores proponen que su regulación al alza favorecería la asimilación de metanol y la producción de HV3.

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