Generación de destabilasa-lisozima recombinante de sanguijuelas medicinales en tres sistemas de expresión diferentes

Destabilase-lysozyme (mlDL) is an enzyme secreted by the salivary gland cells of medicinal leeches. Destabilase-lysozyme possesses lysozyme and isopeptidase activities. We generated recombinant destabilase-lysozyme isoform 2 in three expression systems, i.e., in the bacteria Escherichia coli, in the yeast Pichia pastoris, and in the human cell line Expi293F. In E. coli, we generated both polypeptide in inclusion bodies that was later undergone to the refolding and soluble protein that had been fused with the chaperone SlyD. The chaperone was later cleaved by a specific TEV-protease. In cultures of the yeast P. pastoris and the human cell line Expi293F, the soluble form of destabilase-lysozyme was accumulated in the culture media. For the generated enzymes, we determined the lysozyme, isopeptidase and fibrinolytic activities and tested their general antimicrobial effects. The comparisons of the enzymes generated in the different expression systems revealed that all of the destabilase-lysozymes obtained in the soluble forms possessed equal levels of lysozyme, isopeptidase and fibrinolytic activities that exceeded several to ten times the levels of the same activities of the destabilase-lysozyme renaturated from the inclusion bodies. A similar pattern of the differences in the levels of the general antimicrobial effects was observed for the destabilase-lysozymes generated in the soluble form and as inclusion bodies.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

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La isoforma 2 de la destabilasa-lisozima (mlDL) de la sanguijuela medicinal se produjo de forma recombinante en tres sistemas de expresión: Escherichia coli (soluble y en cuerpos de inclusión), Pichia pastoris y la línea celular humana Expi293F. Se determinaron sus actividades lisozímica, isopeptidásica y fibrinolítica y su efecto antimicrobiano. Todas las formas solubles mostraron actividades iguales, entre varias y diez veces superiores a las de la enzima renaturalizada de los cuerpos de inclusión; el efecto antimicrobiano siguió un patrón similar.

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