Producción de un anticuerpo monoclonal murino contra los venenos de las serpientes Bothrops alternatus y B. neuwiedi y su uso para aislar una fracción de serina proteasa tipo trombina

Accidents with snakes from the genus Bothrops represent ~90 % of all snakebites in Brazil. Monoclonal antibodies (mAbs) targeting venom components can be important assets for treating envenoming syndromes, for developing diagnostic tests and for research purposes. Therefore, in this study, we aimed to generate murine mAbs against the antigenic mixture of Bothropic venoms traditionally used as immunogen to produce Bothropic antivenoms in Brazil. ELISA showed that one of the produced mAbs recognizes B. alternatus and B. neuwiedi venoms (mAb anti-Ba/Bn) specifically and Western Blot revealed that this mAb binds to a single protein band of molecular mass of ≈50 kDa. MAb anti-Ba/Bn inhibited the coagulant activity but was unable to neutralize hemorrhagic and phospholipase A2 activities caused by the B. neuwiedi venom. MAb anti-Ba/Bn was immobilized to Sepharose beads and used for immunoaffinity chromatography of B. neuwiedi venom. Proteolytic activity assays indicated that the immunoaffinity-purified fraction (BnF-Bothrops neuwiedi fraction) has a serine protease thrombin-like profile, which was supported by coagulability assays in mice. Bottom-up proteomic analysis confirmed the prevalence of serine proteases in BnF using label-free quantification. In conclusion, this work characterized a mAb with neutralizing properties against B. neuwiedi coagulant activity and demonstrates that immunoaffinity chromatography using mAbs can be a useful technique for purification of bioactive toxic proteins from Bothrops spp. snake venoms.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

El resumen se deja sin traducir para conservar la redacción original de los autores.

Se generaron anticuerpos monoclonales murinos contra venenos bothrópicos. Uno (anti-Ba/Bn) reconoció específicamente venenos de B. alternatus y B. neuwiedi (banda de ≈50 kDa) e inhibió la actividad coagulante del veneno de B. neuwiedi, sin neutralizar sus actividades hemorrágica ni de fosfolipasa A2. Por inmunoafinidad se aisló una fracción con perfil de serina proteasa tipo trombina; la proteómica confirmó el predominio de serina proteasas. Los autores concluyen que la técnica puede servir para purificar proteínas bioactivas de venenos de Bothrops.

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