Production of a murine mAb against Bothrops alternatus and B. neuwiedi snake venoms and its use to isolate a thrombin-like serine protease fraction
Research article published in International journal of biological macromolecules (2022)
Abstract
Accidents with snakes from the genus Bothrops represent ~90 % of all snakebites in Brazil. Monoclonal antibodies (mAbs) targeting venom components can be important assets for treating envenoming syndromes, for developing diagnostic tests and for research purposes. Therefore, in this study, we aimed to generate murine mAbs against the antigenic mixture of Bothropic venoms traditionally used as immunogen to produce Bothropic antivenoms in Brazil. ELISA showed that one of the produced mAbs recognizes B. alternatus and B. neuwiedi venoms (mAb anti-Ba/Bn) specifically and Western Blot revealed that this mAb binds to a single protein band of molecular mass of ≈50 kDa. MAb anti-Ba/Bn inhibited the coagulant activity but was unable to neutralize hemorrhagic and phospholipase A2 activities caused by the B. neuwiedi venom. MAb anti-Ba/Bn was immobilized to Sepharose beads and used for immunoaffinity chromatography of B. neuwiedi venom. Proteolytic activity assays indicated that the immunoaffinity-purified fraction (BnF-Bothrops neuwiedi fraction) has a serine protease thrombin-like profile, which was supported by coagulability assays in mice. Bottom-up proteomic analysis confirmed the prevalence of serine proteases in BnF using label-free quantification. In conclusion, this work characterized a mAb with neutralizing properties against B. neuwiedi coagulant activity and demonstrates that immunoaffinity chromatography using mAbs can be a useful technique for purification of bioactive toxic proteins from Bothrops spp. snake venoms.
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Zusammenfassung
Production of a murine mAb against Bothrops alternatus and B. neuwiedi snake venoms and its use to isolate a thrombin-like serine protease fraction.
Warum dies für die Hirudotherapie relevant ist
Diese Studie erzeugte einen murinen monoklonalen Antikörper (mAk anti-Ba/Bn), der gegen die Schlangengifte von Bothrops alternatus und B. neuwiedi gerichtet ist, und verwendete ihn mittels Immunaffinitätschromatographie zur Isolierung einer Serinprotease-Fraktion (BnF) mit thrombinähnlicher gerinnungsfördernder Aktivität, bestätigt durch Gerinnbarkeitstests in Mäusen sowie label-freie Proteomik. Der mAk neutralisierte die gerinnungsfördernden, jedoch nicht die hämorrhagischen oder Phospholipase-A2-Aktivitäten des Giftes von B. neuwiedi. Für den ASH-Bereich ist die Verbindung indirekt: Die Studie betrifft Schlangengiftenzyme, die als ‚thrombinähnlich' beschrieben werden – eine konzeptuell parallele Klasse von gerinnungsfördernden/-hemmenden Enzymen zu jenen im Blutegelspeichel –, jedoch sind weder Blutegel, aus Blutegeln stammende Proteine noch Hirudotherapie involviert. Die Relevanz beschränkt sich auf die vergleichende Enzymologie Thrombin-interagierender Proteine aus einer anderen biologischen Quelle, und die Studie ist präklinischer Natur.
Zitation
Production of a murine mAb against Bothrops alternatus and B. neuwiedi snake venoms and its use to isolate a thrombin-like serine protease fraction
Belo AA et al. · International journal of biological macromolecules, 2022
Verwandter klinischer Kontext
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Zur ASH-Bibliothek hinzugefügt: May 27, 2026 · Letzte Aktualisierung der Website: 18. Juni 2026