Herstellung eines murinen monoklonalen Antikörpers gegen die Schlangengifte von Bothrops alternatus und B. neuwiedi und dessen Einsatz zur Isolierung einer thrombinähnlichen Serinprotease-Fraktion

Accidents with snakes from the genus Bothrops represent ~90 % of all snakebites in Brazil. Monoclonal antibodies (mAbs) targeting venom components can be important assets for treating envenoming syndromes, for developing diagnostic tests and for research purposes. Therefore, in this study, we aimed to generate murine mAbs against the antigenic mixture of Bothropic venoms traditionally used as immunogen to produce Bothropic antivenoms in Brazil. ELISA showed that one of the produced mAbs recognizes B. alternatus and B. neuwiedi venoms (mAb anti-Ba/Bn) specifically and Western Blot revealed that this mAb binds to a single protein band of molecular mass of ≈50 kDa. MAb anti-Ba/Bn inhibited the coagulant activity but was unable to neutralize hemorrhagic and phospholipase A2 activities caused by the B. neuwiedi venom. MAb anti-Ba/Bn was immobilized to Sepharose beads and used for immunoaffinity chromatography of B. neuwiedi venom. Proteolytic activity assays indicated that the immunoaffinity-purified fraction (BnF-Bothrops neuwiedi fraction) has a serine protease thrombin-like profile, which was supported by coagulability assays in mice. Bottom-up proteomic analysis confirmed the prevalence of serine proteases in BnF using label-free quantification. In conclusion, this work characterized a mAb with neutralizing properties against B. neuwiedi coagulant activity and demonstrates that immunoaffinity chromatography using mAbs can be a useful technique for purification of bioactive toxic proteins from Bothrops spp. snake venoms.

Abstract aus PubMed (NCBI) für den zitierten Eintrag, in der Originalsprache wiedergegeben. Maßgeblich ist die Fassung der Originalpublikation.

Das Abstract wird nicht übersetzt, damit die eigene Wortwahl der Autoren erhalten bleibt.

Unfälle mit Bothrops-Schlangen machen ≈90 % der Schlangenbisse in Brasilien aus. Gegen das herkömmliche bothropische Antigengemisch wurden murine monoklonale Antikörper erzeugt. Einer davon (mAb anti-Ba/Bn) erkannte in ELISA spezifisch die Gifte von B. alternatus und B. neuwiedi, band im Western Blot an eine einzelne Proteinbande von ≈50 kDa und hemmte die Gerinnungsaktivität von B.-neuwiedi-Gift, nicht aber dessen hämorrhagische und Phospholipase-A2-Aktivität. Über Immunoaffinitätschromatographie isolierten die Autoren die Fraktion BnF mit thrombinähnlichem Serinprotease-Profil und werten die Methode als nützlich zur Aufreinigung bioaktiver Giftproteine.

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