Конкурентное ингибирование гепариназы персульфонированными гликозаминогликанами: инструмент для обнаружения контаминации гепарина

Heparin and the low molecular weight heparins are extensively used as medicinal products to prevent and treat the formation of venous and arterial thrombi. In early 2008, administration of some heparin lots was associated with the advent of severe adverse effects, indicative of an anaphylactoid-like response. Application of orthogonal analytical tools enabled detection and identification of the contaminant as oversulfated chondroitin sulfate (OSCS) was reported in our earlier report. Herein, we investigate whether enzymatic depolymerization using the bacterially derived heparinases, given the structural understanding of their substrate specificity, can be used to identify the presence of OSCS in heparin. We also extend this analysis to examine the effect of other persulfonated glycosaminoglycans (GAGs) on the action of the heparinases. We find that all persulfonated GAGs examined were effective inhibitors of heparinase I, with IC(50) values ranging from approximately 0.5-2 μg/mL. Finally, using this biochemical understanding, we develop a rapid, simple assay to assess the purity of heparin using heparinase digestion followed by size-exclusion HPLC analysis to identify and quantify digestion products. In the context of the assay, we demonstrate that less than 0.1% (w/w) of OSCS (and other persulfonated polysaccharides) can routinely be detected in heparin.

Аннотация взята из PubMed (NCBI) для цитируемой записи и приводится на языке оригинала. Авторитетной является версия в исходной публикации.

Аннотация оставлена без перевода, чтобы сохранить собственные формулировки авторов.

Авторы изучили возможность применения бактериальных гепариназ для выявления избыточно сульфатированного хондроитин сульфата (OSCS) в гепарине с учётом субстратной специфичности этих ферментов. Все исследованные персульфонированные гликозаминогликаны эффективно ингибировали гепариназу I, значения IC50 составляли от приблизительно 0,5 до 2 мкг/мл. На этой основе разработан быстрый простой метод оценки чистоты гепарина, включающий переваривание гепариназой и эксклюзионную ВЭЖХ продуктов деградации; он позволяет рутинно выявлять в гепарине менее 0,1% (масс./масс.) OSCS и других персульфонированных полисахаридов.

Узнайте, как это исследование связано с клинической практикой

Другие рецензируемые исследования в разделе «Антимикробная резистентность».

• Novel Leech Antimicrobial Peptides — Hirunipins — Kumar et al. (2025)
• Лечение пиявками (Hirudo medicinalis) ослабляет повреждения яичка, вызванные ишемией/реперфузией яичка, на экспериментальной модели у животных — Davoodi F et al. (2021)
• AIF-1 и RNASET2 играют комплементарные роли во врождённом иммунном ответе медицинской пиявки — Baranzini N et al. (2019)
• Антимикробные пептиды медицинской пиявки, не обладающие токсичностью, — перспективная альтернативная стратегия борьбы с патогенами, устойчивыми к антибиотикам — Grafskaia E et al. (2019)
• Антимикробная роль белка RNASET2 во врождённом иммунном ответе медицинской пиявки Hirudo verbana — Baranzini N et al. (2020)
• Инфекция Morganella morganii у Hirudo medicinalis (Иран): описание случая — Rahmati Holasoo H et al. (2022)
• Клиническая эффективность Джалаукавачараны (применения пиявок) при тромбированном геморрое — Bhagat P, Raut S, Lakhapati A (2012)
• Определение дисульфидных связей в антимикробных пептидах семейства макинов путём сочетания нисходящей (top-down) и восходящей (bottom-up) протеомики — Hung CW, Jung S, Grötzinger J, Gelhaus C, Leippe M, Tholey A (2014)
• Молекулярная характеристика двух новых антибактериальных пептидов, индуцируемых при бактериальном воздействии, у кольчатого червя — пиявки Theromyzon tessulatum — Tasiemski A, Vandenbulcke F, Mitta G, Lemoine J, Lefebvre C, Sautière PE, Salzet M (2004)
• Семейство мацинов — противомикробных белков, сочетающих антимикробную и нейрорепаративную активность — Jung S, Sönnichsen FD, Hung CW et al. (2012)

Все исследования, проанализированные ASH →