Disminución de la degradación de la hirudina mediante la deleción del gen KEX1 en Pichia pastoris recombinante

Our previous study on recombinant hirudin production in Pichia pastoris demonstrated that, although the total productivity of hirudin was fairly high, its degradation was still severe, even if many engineering methods were applied to improve cell viability and reduce the release of intracellular proteinases. In this work, a pop-in/pop-out method, replacing the auxotrophic marker ARG4 gene with the resistant marker sh ble gene, was used to delete the KEX1 gene to reduce hirudin degradation in P. pastoris GS115Hir. Using this strategy, hirudin degradation was greatly decreased. At the same wet cell weight and cell viability, the percentage of intact hirudin Hir65 in total hirudin in strain GS115HirDeltakex1 was always kept as high as 90% in the initial stage of the methanol fermentation phase and above 62% even in the later stage of the methanol fermentation phase, whereas the percentage for the undeleted strain GS115Hir was only about 40% in the whole methanol fermentation phase. As a result, the intact hirudin Hir65 concentration could maximally reach 2.4 g/l in GS115HirDeltakex1 while it was only 1.1 g/l in GS115Hir.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

El resumen se deja sin traducir para conservar la redacción original de los autores.

Se eliminó el gen KEX1 en la cepa recombinante de Pichia pastoris GS115Hir mediante pop-in/pop-out para reducir la degradación de hirudina. En GS115HirDeltakex1, el porcentaje de hirudina Hir65 intacta se mantuvo en el 90 % al inicio y por encima del 62 % en la fase tardía de la fermentación con metanol, frente a cerca del 40 % en la cepa sin deleción. La concentración máxima de Hir65 intacta alcanzó 2,4 g/l (1,1 g/l en la cepa parental).

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