Producción mejorada de hialuronidasa de sanguijuela mediante la optimización de la secreción y el cultivo en Pichia pastoris

Leech hyaluronidase (LHAase) was recently cloned and successfully expressed in Pichia pastoris. To increase its secretory expression level, four signal peptides (nsB, YTP1, SCS3, and HKR1) and six amphipathic peptides (APs) were comparatively investigated. After substitution with nsB and fusion with AP2, the production of LHAase was significantly increased, from 8.42 × 10(5) to 1.24 × 10(6) U/ml. Compared with the parental LHAase, the variant AP2-LHAase showed a lower optimum pH (5.0), higher optimum temperature (50 °C), and a broader range of thermal stability (20-60 °C). To further promote fermentative production of the variant AP2-LHAase, the cultivation temperature was systematically optimized according to cell viability and alcohol oxidase activity. Eventually, through a combination of N-terminal engineering and optimization of cultivation, the production of LHAase was improved to 1.68 × 10(6) U/ml, with a high productivity of 1.87 × 10(4) U/ml/h.

Resumen tomado de PubMed (NCBI) para el registro citado, en el idioma original. La versión de referencia es la de la publicación original.

El resumen se deja sin traducir para conservar la redacción original de los autores.

Para aumentar la secreción de la hialuronidasa de sanguijuela (LHAase) en Pichia pastoris se compararon cuatro péptidos señal y seis péptidos anfipáticos. Con nsB y AP2 la producción pasó de 8,42 × 10⁵ a 1,24 × 10⁶ U/ml; la variante AP2-LHAase tuvo un pH óptimo menor (5,0), mayor temperatura óptima (50 °C) y estabilidad térmica más amplia (20–60 °C). Tras optimizar la temperatura de cultivo se alcanzaron 1,68 × 10⁶ U/ml, con una productividad de 1,87 × 10⁴ U/ml/h.

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